Detección de alergia a las pirazolonas.

La presente invención se enfrenta al problema de proporcionar un método que presente una sensibilidad adecuada y que permita la evaluación de la reacción alérgica inmediata a pirazolonas.

Para ello los autores de la presente invención han descubierto como sorprendentemente utilizando en un test de activación de basófilos, (TAB) un alergeno de fórmula (I):







IMAGEN-01







permite la evaluación de la reacción alérgica inmediata a pirazolonas con un alto grado de sensibilidad.

Detección de alergia a las pirazolonas

CAMPO DE LA TÉCNICA

La presente invención se encuentra dentro de la medicina y la biología molecular, y se refiere al uso de los metabolitos de la dipirona, y en concreto a la 4-5 metilaminoantipirina (MAA) y la 4-aminoantipirina (AA) , en la elaboración de un medicamento para el diagnóstico de una hipersensibilidad selectiva a las pirazolonas.

ESTADO DE LA TECNICA ANTERIOR

Las reacciones alérgicas a fármacos constituyen un problema importante para la salud pública, causando el 5% de las hospitalizaciones (Bates et al., 1997. JAMA. 1997. 10 277 (4) : p. 307-11) . Los fármacos antiinflamatorios no esteoideos (AINEs) son la causa más común de reacciones alérgicas a fármacos, muchas de las cuales están inducidas por mecanismos de hipersensibilidad (Doña et al., 2012. J Investig Allergol Clin Immunol. 22 (5) : p. 363-71) , tanto de origen inmunológico como de origen no inmunológico. Dentro de las reacciones de origen inmunológico mediadas por IgE, los 15 fármacos comúnmente implicados son las pirazolonas, el paracetamol (acetaminofeno) , el acido acetil salicílico (AAS) , el diclofecaco y el ketorolaco, siendo las pirazolonas el fármaco más frecuente de esta categoría, aunque hasta la fecha no se ha realizado ningún estudio de prevalencia sobre las reacciones alérgicas selectivas a las pirazolonas. 20

Actualmente, el diagnóstico de una hipersensibilidad selectiva a las pirazolonas se basa principalmente en la historia clínica, el test cutáneo y la prueba de provocación oral (Nizankowska-Mogilnickaet al., 2007. Allergy. 62 (10) : p. 1111-8) . Puesto que el test cutáneo tiene baja sensibilidad y la prueba de provocación oral puede provocar efectos secundarios, sería conveniente realizar un método in vitro más seguro y 25 directo, sin embargo todavía no se dispone de un método validado.

El test de activación de basófilos (TAB) ha sido propuesto como nueva herramienta de diagnóstico más segura para evaluar las reacciones alérgicas selectivas (Gamboa et al., 2003. Allergy 58 (4) : p. 312-7.) , aunque por ahora solo está disponible en algunos centros. El TAB se basa en la determinación de la activación de los basófilos después 30 de la incubación de la sangre del paciente con haptenos específicos, mediante la cuantificación de la expresión de CD63 (glicoproteína gp53) en la superficie celular.

Se ha demostrado que el TAB es un buen complemento del test cutáneo para la evaluación de la reacción alérgica inmediata a pirazolonas, aunque la sensibilidad obtenida hasta el momento usando la dipironacomo hapteno es baja (Gomez, E., et al., 2009. ClinExpAllergy, 2009. 39 (8) : p. 1217-24) .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN 5

La presente invención se enfrenta al problema de proporcionar un método que presente una sensibilidad adecuada y que permita la evaluación de la reacción alérgica inmediata a pirazolonas. Para ello los autores de la presente invención han descubierto como sorprendentemente utilizando en un test de activación de basófilos (TAB) un alergeno de fórmula (I) : 10

NNR1R2R3OR4

Fórmula (I)

o cualquiera de sus sales, tautómeros o hidratos en donde:

R1 representa un átomo de hidrógeno, un oxígeno, un arilo, un metilo, alquilo o alqueno de 2 a 5 átomos de carbono o un alcoxicarbonilalquilo de 3 a 6 átomos de 15 carbono en total; donde preferiblemente R1 es un metilo;

R2 representa un átomo de hidrógeno, un amino o un metil-amino, un ariloxi, un arilmercapto, un metilo, un alquilo o alqueno de 2 a 5 átomos de carbono o un hidroxialquilo de 1 a 3 átomos de carbono; o R1 y R2 están acoplados formando juntos un alquileno teniendo de 3 a 5 átomos; donde preferiblemente R2 es un amino o un 20 metil-amino; y

R3 y R4 son independientemente un átomo de hidrógeno, un metilo, un alquilo o alqueno de 2 a 5 átomos de carbono, un cicloalquilo de 5 a 7 átomos de carbono, un hidroxialquilo de 1 a 3 átomos de carbono, un benzilo, un naftilo o fenilo, o un fenilo sustituído por 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser los mismos o diferentes y 25 seleccionados del grupo que consiste en un alcoxi teniendo de 1 a 5 átomos de carbono, un hidroxialquilo teniendo de 1 a 3 átomos de carbono, un alcoxicarbonilo teniendo de 2 a 5 átomos de carbono en total, un alquilmercapto teniendo de 1 a 3 átomos de carbono, y un alquilamino teniendo de 1 a 4 átomos, un dialquilaminoteniendo de 2 a 8 átomos de cabono en total, un átomo de halógeno, un grupo trifluorometil, carboxil, ciano, hidroxil, nitro, amino y acetamido) , o una sal, un hidrato o un solvato de las mimas fisiológicamente aceptable; donde preferiblemente 5 R3 es un metilo y R4 es un fenilo;

se puede llevar a cabo el diagnóstico de la hipersensibilidad (selectiva) a las pirazolonas con un grado de sensibilidad adecuado.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Figura 1. Principal ruta metabólica de la dipirona en humanos.4-metilamino antipirina 10 (MAA) , 4-aminoantipirina (AA) , 4-acetilamino antipirina (AAA) and4-formilamino antipirina (FAA) .

Figura 2. Gráfica de puntos que representa los resultados del paciente 4 del test de activacion de basofilos : control negativo, control positivo (fMLP and anti-IgE) , dipirona, MAA y AA a 0.25 y 2.5 mg/mL. En la figura también se muestra el índice de 15 estimulación en cada caso.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Los autores de la presente invención han identificado una serie de compuestos útiles para el diagnóstico de la alergia a los derivados de pirazolonas. Así, un primer aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) : 20

Fórmula (I)

o cualquiera de sus sales, tautómeros o hidratos, donde:

R1 representa un átomo de hidrógeno, un oxígeno, un arilo, un metilo, un alquilo o alqueno de 2 a 5 átomos de carbono o un alcoxicarbonilalquilo de 3 a 6 átomos de 25 carbono en total; donde preferiblemente R1 es un metilo;

R2 representa un átomo de hidrógeno, un amino o un metil-amino, un ariloxi, un arilmercapto, un metilo, un alquilo o alqueno de 2 a 5 átomos de carbono o un hidroxialquilo de 1 a 3 átomos de carbono; o R1 y R2 están acoplados formando juntos un alquileno teniendo de 3 a 5 átomos; donde preferiblemente R2 es un amino o un metil-amino; y 5

R3 y R4 son independientemente un átomo de hidrógeno, un metilo, un alquilo o alqueno de 2 a 5 átomos de carbono, un cicloalquilo de 5 a 7 átomos de carbono, un hidroxialquilo de 1 a 3 átomos de carbono, un benzilo, un naftilo o fenilo, o un fenilo sustituído por 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser los mismos o diferentes y seleccionados del grupo que consiste en un alcoxi teniendo de 1 a 5 átomos de 10 carbono, un hidroxialquilo teniendo de 1 a 3 átomos de carbono, un alcoxicarbonilo teniendo de 2 a 5 átomos de carbono en total, un alquilmercapto teniendo de 1 a 3 átomos de carbono, y un alquilamino teniendo de 1 a 4 átomos, un dialquilamino teniendo de 2 a 8 átomos de cabono en total, un átomo de halógeno, un grupo trifluorometil, carboxil, ciano, hidroxil, nitro, amino y acetamido) , o una sal, un hidrato o 15 un solvato de las mimas fisiológicamente aceptable; donde preferiblemente R3 es un metilo y R4 es un fenilo;

para la elaboración de un medicamento para el diagnóstico de la hipersensibilidad (selectiva) a las pirazolonas. Alternativamente la presente invención también se refiere a la composición de formula I tal y como se han definido arriba, para su uso en el 20 diagnóstico de la hipersensibilidad (selectiva) a las pirazolonas.

Se hace notar que algunos de los compuestos que presentan una estructura de formula I resultan especialmente útiles para llevar a cabo el método de la presente invención, tal y como se muestra en los ejemplos con los metabolitos derivados de la dipirona, 4-metilaminoantipirina (MAA) y 4-aminoantipirina (AA) . Así, en una 25 realización preferida del primer aspecto de la invención, el compuesto de formula I se selecciona de la lista que consiste en 4-metilaminoantipirina (MAA) y/o 4-aminoantipirina (AA) o cualquiera de sus sales, tautómeros o hidratos.

Adicionalmente, una realización aún más preferida de la invención se refiere al uso de una composición que comprende 4-metilaminoantipirina (MAA) y/o 4-aminoantipirina 30 (AA) o cualquiera de sus sales, tautómeros o hidratos, para la elaboración de un medicamento para el diagnóstico de la hipersensibilidad (selectiva) al metamizol, dipirona, propifenazona, fenilbutazonaooxifenbutazona, aminopirina o cualquiera de sus sales, tautómeros o hidratos farmacéuticamente aceptables. Así, en esta realización de la invención las pirazolonas frente a las cuales se está...

1. Uso de un compuesto de fórmula (I) :

Fórmula (I)

o cualquiera de sus sales, tautómeros o hidratos, donde: 5

R1 representa un átomo de hidrógeno, un oxígeno, un arilo, un metilo, un alquilo o alqueno de 2 a 5 átomos de carbono o un alcoxicarbonilalquilo de 3 a 6 átomos de carbono en total; donde preferiblemente R1 es un metilo;

R2 representa un átomo de hidrógeno, un amino o un metil-amino, un ariloxi, un arilmercapto, un metilo, un alquilo o alqueno de 2 a 5 átomos de carbono o un 10 hidroxialquilo de 1 a 3 átomos de carbono; o R1 y R2 están acoplados formando juntos un alquileno de 3 a 5 átomos; donde preferiblemente R2 es un amino o un metil-amino; y

R3 y R4 son independientemente un átomo de hidrógeno, un metilo, un alquilo o alqueno de 2 a 5 átomos de carbono, un cicloalquilo de 5 a 7 átomos de carbono, un 15 hidroxialquilo de 1 a 3 átomos de carbono, un benzilo, un naftilo o fenilo, o un fenilo sustituído por 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser los mismos o diferentes y seleccionados del grupo que consiste en un alcoxi teniendo de 1 a 5 átomos de carbono, un hidroxialquilo teniendo de 1 a 3 átomos de carbono, un alcoxicarbonilo teniendo de 2 a 5 átomos de carbono en total, un alquilmercapto teniendo de 1 a 3 20 átomos de carbono, y un alquilamino teniendo de 1 a 4 átomos, un dialquilamino teniendo de 2 a 8 átomos de cabono en total, un átomo de halógeno, un grupo trifluorometil, carboxil, ciano, hidroxil, nitro, amino y acetamido) , o una sal, un hidrato o un solvato de las mimas fisiológicamente aceptable; donde preferiblemente R3 es un metilo y R4 es un fenilo; 25

parala elaboración de un medicamento para el diagnóstico de la hipersensibilidad (selectiva) a las pirazolonas.

2. Uso según la reivindicación 1, donde el compuesto se selecciona de la lista que consiste en 4-metilaminoantipirina (MAA) y/o 4-aminoantipirina (AA) o cualquiera de sus sales, tautómeros o hidratos.

3. Uso de una composición que comprende 4-metilaminoantipirina (MAA) y/o 4-5 aminoantipirina (AA) o cualquiera de sus sales, tautómeros o hidratos, para la elaboración de un medicamento para el diagnóstico de la hipersensibilidad (selectiva) al metamizol, dipirona, propifenazona, fenilbutazona, oxifenbutazona ó aminopirina o cualquiera de las sales, tautómeros o hidratos farmacéuticamente aceptables de estos compuestos. 10

4. Uso de una composición que comprende un compuesto tal y como éste se ha definido en cualquiera de la reivindicaciones 1-3 para el diagnóstico de la hipersensibilidad, preferiblemente a pirazonolas.

5. Un método in vitro para el diagnóstico de una reacción alérgica a una pirazolona, que comprende las siguientes etapas:

a. Recoger una muestra biológica de un individuo, preferiblemente de sangre, más preferiblemente de sangre total, e incubarla con un compuesto tal y como éste se ha definido en cualquiera de las 20 reivindicaciones 1-3;

b. cuantificar la cantidad de anticuerpos IgE específicos que se generan contra el compuesto del apartado a) ;

c. comparar la cantidad obtenida en la etapa b) con la cantidad obtenida en una muestra control negativa; y 25

d. diagnosticar al individuo como alérgico cuando el valor obtenido en la etapa c) es superior al control negativo.

6. El método según la reivindicación 5, en el que la etapa b) se lleva a cabo mediante una técnica seleccionada de entre el grupo que consiste en: TAB 30 (Test de Activación de Basófilos) ; ELISA (ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas) , FAST (test de fluorescencia-alergoadsorción) , MAST (test múltiple de quimioluminiscencia alergoadsorción) LAST (test látex alergoadsorción) , RAST (test de radioalergoadsorción) , RIA (Radioinmunoensayo) , EIA (Enzimoinmunoensayo) , y FIA ( (Fluoroinmunoensayo) . 35

7. Un método in vitro para diagnosticar la hipersensibilidad (selectiva) a las pirazolonas que comprende los siguientes pasos:

a. Recoger una muestra de sangre de un sujeto, preferiblemente una muestra de sangre total;

b. Contactar in vitro la muestra de sangre del paso a) con un compuesto 5 tal y como éste se ha definido en la reivindicación 1;

c. Determinar los niveles de expresión de los marcadores de activación de la superficie celular de los basófilos de la muestra de sangre del sujeto;

d. Comparar los niveles de expresión del paso c) con los niveles de expresión de los marcadores de activación en ausencia del compuesto 10 del paso b) ;

donde si el valor obtenido en la etapa d) está incrementado resulta indicativo de que el sujeto presenta hipersensibilidad (selectiva) a las pirazolonas.

8. El método de la reivindicación 7, donde el marcador de activación de la 15 superficie celular de los basófilos se selecciona de la lista que consiste en CD203c, CD63, CD13, CD107a, CD164, CD80, CD86, CD40L, HLA-DR, CD123, CRTH2, Ph-CREB, Ph-STAT5, Ph-S6rp, Ph-elIF4E, y CREB.

9. El método de la reivindicación 8 donde el marcador de activación es CD63. 20

10. El método según cualquiera de las reivindicaciones 7-9, donde la determinación de los niveles de expresión del marcador de activación de la superficie celular de los basófilos comprende poner en contacto una muestra de sangre total del sujeto con un anticuerpo que presente especificidad frente a 25 dicho marcador de activación de superficie celular y cuantificar la presencia del anticuerpo unido a los basófilos.

11. El método según cualquiera de las reivindicaciones 7-10 donde el compuesto del paso b) es 4-metilaminoantipirina (MAA) , 4-aminoantipirina (AA) o la 30 combinación de ambos.

12. El método según la reivindicación 11 donde dicho método diagnostica la hipersensibilidad (selectiva) de un sujeto al metamizol, dipirona, propifenazona,

fenilbutazona, oxifenbutazona o aminopirina o cualquiera de sus sales, tautómeros o hidratos farmacéuticamente aceptables.

13. El método según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 12 donde si el valor obtenido en la etapa d) es mayor o igual a 2 veces al valor obtenido en 5 ausencia del compuesto del paso b) , esto resulta indicativo de que el sujeto presenta hipersensibilidad (selectiva) .

14. kit para el diagnóstico de la hipersensibilidad (selectiva) a las pirazolonas que comprende: 10

a. al menos un compuesto tal y como se define éste en la reivindicación 1; y

b. al menos un anticuerpo o un fragmento activo del mismo capaz de unirse a IgE o a un marcador de activación de la superficie celular de los basófilos. 15

15. El kit según la reividicación 14 donde el compuesto es 4-metilaminoantipirina (MAA) y/o 4-aminoantipirina (AA) .

16. El kit según cualquiera de las reivindicaciones 14 o 15 donde el anticuerpo o el 20 fragmento activo del mismo es capaz de unirse a un marcador de activación de la superficie celular de los basófilos seleccionado de la lista que consiste en CD203c, CD63, CD13, CD107a, CD164, CD80, CD86, CD40L, HLA-DR, CD123, CRTH2, Ph-CREB, Ph-STAT5, Ph-S6rp, Ph-elIF4E, y CREB.

17. El kit según la reivindicación 16 donde el anticuerpo o el fragmento activo del mismo es capaz de unirse al marcador de activación de la superficie celular de los basófilos CD63.

18. El kit según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 17 que además contiene 30 uno o más contenedores donde se situa el anticuerpo o el fragmentos activo y el compuesto, donde además opcionalmente comprende instrucciones impresas con el modo de utilizar dicho kit.

19. Uso del kit según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18 para el diagnóstico de la hipersensibilidad (selectiva) a las pirazolonas.

20. Uso de una composición tal y como se define éste en la reivindicación 1, para la elaboración de un medicamento para su uso en terapia. 5

21. Uso de una composición que comprende 4-metilaminoantipirina (MAA) y/o 4-aminoantipirina (AA) o cualquiera de sus sales, tautómeros o hidratos, para la elaboración de un medicamento para su uso en terapia.