Procedimiento de producción del virus de la gripe.

Un procedimiento de producción del virus de la gripe según el cual:

a. se administra a unas gallinas una vacuna contra la gripe,

b. se recogen los huevos de gallinas vacunadas,

c. se activa el proceso de embriogénesis,

d. se infectan los huevos embrionados inoculando un virus de la gripe en la cavidad alantoica,

e. se incuban los huevos embrionados infectados en condiciones de temperatura y de humedad que permiten la replicación del virus, y

f. se extrae el líquido alantoico que contiene el virus.

Procedimiento de producción del virus de la gripe

La invención tiene por objeto un procedimiento de producción del virus de la gripe utilizando unos huevos que provienen de gallinas vacunadas contra la gripe, así como a la utilización de tal procedimiento para la fabricación de una vacuna contra la gripe.

Actualmente, se conocen tres tipos de virus de la gripe (A, B y C), siendo los virus de tipo A responsables de afecciones animales y humanas, mientras que los virus de tipo B y C son sobre todo patógenos para el hombre. Los virus de tipo A están subdivididos en subtipos en función de la estructura antigénica de la hemaglutinina (HA) y de la neuramlnldasa (NA), que son las principales gllcoproteínas de la envoltura viral. Se distinguen 16 subtipos de HA (H1 a H16) y 9 subtipos de NA (N1 a N9). El subtipo de un virus de tipo A está por lo tanto definido bajo el subtipo de HA y el subtipo de NA, que están presentes en la envoltura viral. Los pájaros salvajes constituyen el reservorlo de todos los subtipos de influenza A. Algunos subtipos de virus influenza de tipo A infectan de manera endémica o epidérmica (epidemias anuales) a los pájaros domésticos (diversos subtipos de los cuales H5N1 y H9N2), el caballo (H3N8 principalmente), el cerdo (H1N1, H3N2 y H1N2 principalmente) así como el ser humano (H1N1 y H3N2 principalmente). El perro, el gato y otras especies salvajes pueden también ocasionalmente ser infectados por algunos subtipos (H3N8 y H5N1 en el perro; H5N1 en el gato).

En el campo veterinario, las aves de corral, y más particularmente los polluelos, los pollos, las gallinas y los gallos, representan en número la población más elevada susceptible de ser afectada por el virus de la gripe. Las cepas de gripe aviar de subtipo H5 y H7 pueden ser de dos patotlpos: un patotipo poco patógeno ("low path" o LP) y un patotipo altamente patógeno ("high path" o HP). Las cepas HP son responsables de la peste aviar y derivan de las cepas LP H5 y H7 después de mutaciones/lnserclones, en particular a nivel del sitio de escisión de la hemaglutinina (presencia de múltiples aminoácidos básicos). Hasta ahora, se recomiendan sobre todo unas medidas sanitarias estrictas y unos controles regulares en los criaderos para prevenir la gripe aviar, y en particular la infección por los subtipos H5 y H7.

En el hombre, se recomienda la vacunación contra las cepas virales circulantes de temporada responsables de epidemias más o menos importantes según los años. La mayoría de las vacunas actuales se producen utilizando unos huevos de gallina embrlonados, siendo estos huevos infectados con tres cepas de virus gripal diferentes (dos cepas de virus gripal de tipo A que tienen el subtipo H3N2 y H1N1 y una cepa de virus de tipo B). Se utilizan unos huevos embrionados de gallinas no vacunadas contra la gripe para evitar cualquier fenómeno de interferencia que podría perjudicar a la replicación del virus. En efecto, se sabe que los anticuerpos maternales son transferidos a los polluelos después de haber estado en el huevo y los protegen contra las infecciones microbianas durante los primeros días de la vida, pero, en contrapartida, son la causa de una inmunidad deficiente si se vacuna prematuramente a unos polluelos contra un agente microbiano mientras que existan todavía unos anticuerpos protectores maternales contra este agente. Stone H. et al. (1992, Avian Dis. 36: 148-151) han mostrado que se podía inmunizar de manera pasiva unos polluelos recién nacidos contra la enfermedad de Newcastle inoculando yema de huevo que proviene de gallinas inmunizadas contra el virus de la enfermedad de Newcastle (NDV). Sin embargo, si tras la administración de las yemas de huevo, se vacunan los polluelos con el virus NDV, se observa una disminución de la respuesta inmunitaria a la vacuna. Se sabe también, según los trabajos de Hamal et al. (26, Poultry Science 65: 1364-1372), que los porcentajes de transferencia de los anticuerpos maternales protectores a los polluelos recién nacidos, en particular la transferencia de los anticuerpos dirigidos contra el virus NDV o el virus de la bronquitis infecciosa (IBV), se sitúan entre el 3% y el 4% (índice del porcentaje de anticuerpos en el plasma de la gallina que circula en la sangre del polluelo de tres días), lo que indica que una gran cantidad de los anticuerpos maternales es secuestrada en el huevo. Esto se ha confirmado por los trabajos de Beck J.R et al. (23, Avian Dis. 47:1196-1199), que muestran que todos los huevos contienen unos anticuerpos anti HA, aproximadamente 3 semanas después de haber vacunado unas gallinas con una cepa de virus gripal inactivada. Se conoce finalmente, según los trabajos de Fontaine et al. (1963, Pathobiologie, 11/9: 611-613), que si se inocula un suero antigripal en huevos embrionados, se protegen los huevos contra la infección del virus gripal. Todas estas razones han llevado el experto en la técnica a considerar que si se utilizaban unos huevos de gallinas vacunadas contra la gripe, debido a la transferencia de los anticuerpos maternales dirigidos contra la gripe en los huevos, estos se volverían Incapaces para la producción de virus gripales.

Desde el principio de los años 2, la incidencia económica de la gripe aviar en los criaderos de aves domésticas no deja de crecer con la aparición de cepas de virus aviares altamente contagiosas y patógenas, diezmando criaderos enteros de pollos o, en los casos menos dramáticos, deteniendo la puesta de huevos en las gallinas infectadas. El tipaje de HA de las cepas de virus altamente patógenas muestra que tienen casi todas el subtipo H5 o H7. Se teme ahora que las cepas de virus que tienen el subtipo H5 o H7 no se adapten al ser humano y puedan ser el origen de una verdadera pandemia de gripe en el hombre; casos grabes de gripe humana, ciertamente aislados, que implican estos subtipos, ya han sido comunicados.

Frente al riesgo de que el suministro de huevos pueda no ser siempre asegurado para fabricar la vacuna antigripal, los nuevos métodos de producción de vacunas contra la gripe se orientan actualmente hacia la utilización de

sistemas de cultivo celular.

Resumen de la invención

A pesar de los nuevos modos de producción de las vacunas gripales, existe no obstante siempre una necesidad de poder producir, en cualquier circunstancia, en un tiempo reducido y en una cantidad muy grande el virus gripal para fabricar la vacuna contra la gripe. La presente invención responde a esta necesidad describiendo un procedimiento de producción del virus de la gripe basado, contra toda previsión, en la utilización de huevos que provienen de gallinas previamente vacunadas contra la gripe.

Un objetivo de la invención se refiere en efecto:

A un procedimiento de producción del virus de la gripe según el cual:

a. se administra a gallinas una vacuna contra la gripe,

b. se recogen los huevos de las gallinas vacunadas,

c. se activa el proceso de embriogénesis,

d. se infectan los huevos embrionados inoculando un virus de la gripe en la cavidad alantoica,

e. se incuban los huevos embrionados infectados en condiciones de temperatura y de humedad que permiten la replicación del virus, y

f. se recoge el liquido alantoico que contiene el virus.

De manera preferida, la vacuna protege las gallinas contra la gripe aviar.

Típicamente, la vacuna contra la gripe comprende en su composición la hemaglutinina de un virus de la gripe en forma de proteína y/o de gen que codifica esta proteína. Según un aspecto, la composición de la vacuna contra la gripe contiene un virus gripal entero e inactivado.

Según otro aspecto, la composición de la vacuna contra la gripe contiene un producto derivado de un virus gripal entero.

Según también otro aspecto, la composición de la vacuna contiene también un adyuvante.

En otro aspecto, la composición de la vacuna contra la gripe contiene un virus gripal atenuado.

Según otra modalidad, la vacuna contra la gripe comprende un vector que comprende un gen que codifica para la hemaglutinina de un virus gripal.

De manera preferida, el vector es un poxvirus.

En un aspecto particular, el vector comprende también un gen que codifica para la neuraminidasa de un virus gripal. Según otro aspecto, la composición de la vacuna contiene también un adyuvante.

Según un modo de realización del procedimiento según la invención, la hemaglutinina del virus de la gripe en forma de proteína y/o de gen que codifica para esta proteína contenida en la composición de la vacuna que se administra a las gallinas y la hemaglutinina del virus de la gripe que se utiliza para infectar la cavidad alantoica de los huevos embrionados de las gallinas vacunadas tienen unos subtipos diferentes.

1. Un procedimiento de producción del virus de la gripe según el cual:

a. se administra a unas gallinas una vacuna contra la gripe,

b. se recogen los huevos de gallinas vacunadas,

c. se activa el proceso de embrlogénesls,

d. se infectan los huevos embrionados inoculando un virus de la gripe en la cavidad alantoica,

e. se incuban los huevos embrionados infectados en condiciones de temperatura y de humedad que permiten la repllcaclón del virus, y

f. se extrae el líquido alantoico que contiene el virus.

2. Un procedimiento según la reivindicación 1, según el cual la vacuna protege las gallinas contra la gripe aviar.

3. Un procedimiento según la reivindicación 1 o 2, según el cual la vacuna contra la gripe comprende en su composición la hemaglutinina de un virus de la gripe en forma de proteína y/o de gen que codifica para esta proteína.

4. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, según el cual la composición de la vacuna contra la gripe contiene un virus de la gripe completo e inactivado.

5. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 4, según el cual la composición de la vacuna contra la gripe contiene un producto derivado de un virus de la gripe completo.

6. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, según el cual la composición de la vacuna contiene además un adyuvante.

7. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, según el cual la composición de la vacuna contra la gripe contiene un virus de la gripe atenuado.

8. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, según el cual la vacuna contra la gripe comprende un vector que comprende un gen que codifica para la hemaglutinina de un virus de la gripe.

9. Un procedimiento según la reivindicación 8, según el cual este vector es un poxvirus.

1. Un procedimiento según la reivindicación 8 o 9, según el cual el vector comprende también un gen que codifica para la neuraminidasa de un virus de la gripe.

11. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 8 a 1, según el cual la composición de la vacuna contiene además un adyuvante.

12. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 3 a 11, según el cual la hemaglutinina del virus de la gripe está en forma de proteína y/o de gen que codifica para esta proteína, contenida en la composición de la vacuna que se administra a las gallinas y la hemaglutinina del virus de la gripe que se utiliza para infectar la cavidad alantoica de los huevos embrionados de las gallinas vacunadas tienen unos subtipos diferentes.

13. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 3 a 11, según el cual la hemaglutinina del virus de la gripe está en forma de proteína y/o de gen que codifica para esta proteína, contenida en la composición de la vacuna que se administra a las gallinas y la hemaglutinina del virus de la gripe que se utiliza para infectar la cavidad alantoica de los huevos embrionados de las gallinas vacunadas tienen el mismo subtipo.

14. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 3 a 11, según el cual la hemaglutinina del virus de la gripe está en forma de proteína y/o de gen que codifica para esta proteína contenida en la composición de la vacuna que se administra a las gallinas y la hemaglutinina del virus de la gripe que se utiliza para infectar la cavidad alantoica de los huevos embrionados de las gallinas vacunadas son idénticas.

15. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 4, 6 o 7, según el cual el virus de la gripe contenido en la composición de la vacuna que se administra a las gallinas es idéntico al virus de la gripe que se utiliza para infectar la cavidad alantoica de los huevos embrionados de las gallinas vacunadas.

16. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 12 a 15, según el cual la hemaglutinina del virus de la gripe

en forma de proteína y/o de gen que codifica para esta proteína contenida en la composición de la vacuna que se administra a las gallinas y la hemaglutinina del virus de la gripe que se utiliza para infectar la cavidad alantoica de los huevos embrionados de las gallinas vacunadas tienen el subtipo H5, H6, H7 o H9.

17. Un procedimiento según la reivindicación 16, según el cual la hemaglutinina del virus de la gripe en forma de proteína y/o de gen que codifica para esta proteína contenida en la composición de la vacuna que se utiliza para vacunar las gallinas contra la gripe y la hemaglutinina del virus de la gripe que se utiliza para infectar la cavidad alantoica de los huevos embrionados de gallinas vacunadas tienen el subtipo H5 o H7.

18. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 17, que comprende una etapa suplementaria de purificación del virus.

19. Un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 18, que comprende una etapa suplementaria de inactivación del virus.

2. Utilización de un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 19, para la fabricación de una vacuna destinada a la prevención de la gripe.

21. Utilización de un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 19, para la fabricación de una vacuna destinada a la prevención de la gripe humana pandémica.

22. Utilización de un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 19, para la fabricación de una vacuna destinada a la prevención de la gripe humana epidémica.

23. Utilización de un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 19, para la fabricación de una vacuna destinada a la prevención de la gripe en los équidos, los suidos, los cánidos, los félidos, los mustélidos y las especies aviares.

24. Utilización de huevos de gallinas vacunadas contra la gripe para la producción de un virus de la gripe.

25. Utilización de huevos de gallinas vacunadas contra la gripe para la producción de una vacuna contra la gripe.

26. Utilización de huevos de gallinas vacunadas contra la gripe según la reivindicación 24 o 25, según la cual los huevos contienen unos anticuerpos dirigidos contra la hemaglutinina del virus de la gripe.

27. Utilización según la reivindicación 26, según la cual los anticuerpos están dirigidos contra la hemaglutinina del virus de la gripe que tiene el subtipo H5, H6, H7 o H9.