Anticuerpos antagonistas de IL-17.

Un anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, que comprende ambos dominios variables de cadena pesada (VH) y cadena ligera (VL),

para su uso en el tratamiento de la espondilitis anquilosante, en el que dicho anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, comprende al menos un sitio de unión al antígeno que comprende:

a) un VH que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, teniendo dicha CDR1 la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:1, teniendo dicha CDR2 la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2, y teniendo dicha CDR3 la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:3, en el que dichas regiones hipervariables están de acuerdo con la definición de Kabat; o

un VH que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDR1-x, CDR2-x y CDR3-x, teniendo dicha CDR1- x la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:11, teniendo dicha CDR2-x la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:12, y teniendo dicha CDR3-x la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:13, en el que dichas regiones hipervariables están de acuerdo con la definición de Chothia; y

b) un VL que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDR1', CDR2' y CDR3', teniendo dicha CDR1' la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:4, teniendo dicha CDR2' la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:5, y teniendo dicha CDR3' la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:6.

Anticuerpos antagonistas de IL-17

Esta invención se refiere a una molécula de unión a IL-17, en particular un anticuerpo contra la IL-17 humana, más preferiblemente un anticuerpo humano contra la IL-17 humana (también denominada IL-17A) y al uso de dichos anticuerpos en el tratamiento de enfermedades y trastonos mediados por IL-17.

La IL-17, una citoquina derivada de células T presente, por ejemplo, en la artritis reumatoide (RA) , actúa como una citoquina proinflamatoria, en particular junto con IL-1 y TNF-α (Chabaud M. y Miossec P. (1999) , Arthritis Rheum., 42, 963-970; Awane M. et al. (1999) , J. Immunol., 162, 5337-5344) . La IL-17 induce la producción de MMP e infrarregula a TIMP (Jovanovic D.V. et al. (2001) , J. Rheumatol., 28, 712-718) , y el bloqueo de IL-1 e IL-17 tiene un efecto sinérgico sobre la inflamación y la destrucción ósea in vivo (Chabaud M. y Miossec (2001) , Arthritis Rheum., 44, 1293-1303) . Una producción inapropiada o excesiva de IL-17 está asociada con la patología de diversas enfermedades y trastornos, tales como la artritis reumatoide (Witowski et al., 2004, Cell Mol. Life Sci., 61:567-579) , la osteoartritis, el aflojamiento de implantes óseos, el rechazo de transplantes agudo (Antonysamy et al., 1999, J. Immunol., 162, 577-584; van Kooten et al., 1998, J. Am. Soc. Nephrol., 9, 1526-1534) , la septicemia, el choque séptico o endotóxico, alergias, asma (Molet et al., 2001, J. Allergy Clin. Immunol., 108, 430-438) , la pérdida ósea, la psoriasis (Teunissen et al., 1998, J. Invest. Dermatol., 111, 645-649) , la isquemia, la esclerosis sistémica (Kurasawa et al., 2000, Arthritis Rheum., 43, 2455-2463) , el ictus y otros trastornos inflamatorios. Se han propuesto anticuerpos contra IL-17 para su uso en el tratamiento de enfermedades y trastornos mediados por IL-17; véase, por ejemplo, el documento WO 95/18826 y el análisis en su introducción.

Los inventores ahora han preparado anticuerpos contra la IL-17 humana mejorados que son adecuadas para su uso en el tratamiento de enfermedades y trastornos mediados por IL-17.

Además, la molécula de unión a IL-17 para su uso en la presente invención comprende dominios variables de cadena pesada (VH) y ligera (VL) ; dicha molécula de unión a IL-17 comprende al menos un sitio de unión al antígeno que comprende:

a) un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, teniendo dicha CDR1 la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:1, teniendo dicha CDR2 la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2, y teniendo dicha CDR3 la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:3 o sus equivalentes de CDR directos; y

b) un dominio variable de cadena ligera de inmunoglobulina (VL) que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDR1', CDR2' y CDR3', teniendo dicha CDR1' la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:4, teniendo dicha CDR2' la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:5, y teniendo dicha CDR3' la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:6 o sus equivalentes de CDR directos.

La presente invención proporciona un anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, que comprende dominios variables de cadena pesada (VH) y ligera (VL) para su uso en el tratamiento de la esclerosis múltiple, la espondilitis anquilosante, la artritis psoriática, la artritis reumatoide o la uveitis, en el que dicho anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, comprende al menos un sitio de unión al antígeno que comprende:

a) un VH que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, teniendo dicha CDR1 la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:1, teniendo dicha CDR2 la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2, y teniendo dicha CDR3 la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:3, en el que dichas regiones hipervariables están de acuerdo con la definición de Kabat; o un VH que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDR1-x, CDR2-x y CDR3-x, teniendo dicha CDR1x la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:11, teniendo dicha CDR2-x la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:12, y teniendo dicha CDR3-x la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:13, en el que dichas regiones hipervariables están de acuerdo con la definición de Chothia; y

b) un VL que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDR1', CDR2' y CDR3', teniendo dicha CDR1' la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:4, teniendo dicha CDR2' la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:5, y teniendo dicha CDR3' la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:6.

En una realización específica, el anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, para su uso según el párrafo previo, es un anticuerpo humano.

En otra realización, un anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, para su uso según cualquiera de los dos aspectos previos, comprende al menos un sitio de unión al antígeno que comprende:

a) un VH que tiene una secuencia de aminoácidos según se muestra en SEQ ID NO:8;

b) un VL que tiene una secuencia de aminoácidos según se muestra en SEQ ID NO:10; o

c) un VH que tiene una secuencia de aminoácidos según se muestra en SEQ ID NO:8, y un VL que tiene una secuencia de aminoácidos según se muestra en SEQ ID NO:10.

En otro aspecto, el anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos activos, para su uso según cualquiera de los aspectos previos, se coadministra, al mismo tiempo o en secuencia, con al menos una segunda sustancia de fármaco seleccionada del grupo que consiste en agentes inmunosupresores, agente inmunomoduladores, agentes antiinflamatorios, agentes quimioterapéuticos o agentes antiinfecciosos.

En otro aspecto, el anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos activos, para su uso según cualquiera de los aspectos previos, se coadministra, al mismo tiempo o en secuencia, con sales de oro, sulfasalazina, antimaláricos, metotrexato, D-penicilamina, azatioprina, ácido micofenólico, ciclosporina A, tacrolimus, sirolimus, minociclina, leflunomida, glucocorticoides; un inhibidor de calcineurina, un modulador de la recirculación de linfocitos, por ejemplo, FTY720 y análogos de FTY720; un inhibidor de mTOR, por ejemplo, rapamicina, 40-O- (2-hidroxietil) rapamicina, CCI779, ABT578, AP23573 o TAFA-93; una ascomicina que tiene propiedades inmunosupresoras, por ejemplo, ABT-281, ASM981, etc.; corticosteroides; ciclofosfamida; leflunomida; mizoribina; ácido micofenólico; micofenolato mofetilo; 15-desoxiespergualina.

A menos que se indique lo contrario, cualquier cadena polipeptídica se describe en la presente como una secuencia de aminoácidos que comienza en el extremo N-terminal y termina en el extremo C-terminal.

Cuando el sitio de unión al antígeno comprende ambos dominios VH y VL, estos pueden localizarse sobre la misma molécula polipeptídica o, preferiblemente, cada dominio puede estar sobre una cadena diferente, siendo el dominio de VH parte de una cadena pesada de inmunoglobulina, o de uno de sus fragmentos, y siendo el VL parte de una cadena ligera de inmunoglobulina, o de uno de sus fragmentos.

Una "molécula de unión a IL-17" significa cualquier molécula capaz de unirse al antígeno de IL-17 sola o asociada con otras moléculas. La reacción de unión puede demostrarse mediante métodos convencionales (ensayos cualitativos) que incluyen, por ejemplo un ensayo de unión, un ensayo de competición o un bioensayo para determinar la inhibición de la unión de IL-17 a su receptor, o cualquier tipo de ensayo de unión, con referencia a un ensayo de control negativo en el que se emplea un anticuerpo con una especificidad no relacionada, pero del mismo isotipo, por ejemplo, un anticuerpo anti-CD25 (véase también el ejemplo 1) .

Los ejemplos de moléculas de unión al antígeno incluyen anticuerpos producidos por célula B o hibridomas, y anticuerpos quiméricos, injertados con CDR o humanos, o cualquier de sus fragmentos, por ejemplo, fragmentos F (ab') 2 y Fab, así como anticuerpos monocatenarios o de un solo dominio.

Un anticuerpo monocatenario consiste en los dominios variables de las cadenas pesada y ligera de un anticuerpo unidos covalentemente por un conector peptídico que habitualmente consiste en 10 a 30 aminoácidos, preferiblemente de 15 a 25 aminoácidos. Por tanto, esta estructura no incluye la parte constante de las cadenas pesada y ligera, y se cree que un espaciador peptídico pequeño debería ser menos antigénico que una parte constante completa. Un "anticuerpo quimérico" significa un anticuerpo en el que las regiones constantes de las cadenas pesada o ligera, o ambas, son de origen humano, mientras que los dominios variables de las cadenas pesada y ligera son de origen no humano (por ejemplo, murino) o tienen un origen humano pero se derivan de un anticuerpo... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, que comprende ambos dominios variables de cadena pesada (VH) y cadena ligera (VL) , para su uso en el tratamiento de la espondilitis anquilosante, en el que dicho anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, comprende al menos un sitio de unión al antígeno que comprende:

a) un VH que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, teniendo dicha CDR1 la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:1, teniendo dicha CDR2 la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2, y teniendo dicha CDR3 la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:3, en el que dichas regiones hipervariables están de acuerdo con la definición de Kabat; o un VH que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDR1-x, CDR2-x y CDR3-x, teniendo dicha CDR1x la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:11, teniendo dicha CDR2-x la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:12, y teniendo dicha CDR3-x la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:13, en el que dichas regiones hipervariables están de acuerdo con la definición de Chothia; y

b) un VL que comprende, en secuencia, las regiones hipervariables CDR1', CDR2' y CDR3', teniendo dicha CDR1' la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:4, teniendo dicha CDR2' la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:5, y teniendo dicha CDR3' la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:6.

2. El anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, para su uso según la reivindicación 1, que es un anticuerpo humano.

3. Un anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 20 anteriores, que comprende al menos un sitio de unión al antígeno que comprende:

a) un VH que tiene una secuencia de aminoácidos según se muestra en SEQ ID NO:8;

b) un VL que tiene una secuencia de aminoácidos según se muestra en SEQ ID NO:10; o c) un VH que tiene una secuencia de aminoácidos según se muestra en SEQ ID NO:8, y un VL que tiene una secuencia de aminoácidos según se muestra en SEQ ID NO:10.

4. Un anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es un anticuerpo IgG1/K humano que comprende:

(a) una cadena ligera que consiste en los restos aminoácidos que comienzan en el resto +1 de la tabla 10

y

(b) una cadena pesada que comprende en los restos aminoácidos que comienzan en el resto +1 de la tabla 11

5. El anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos , para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, se coadministra, al mismo tiempo o en secuencia, con al menos una segunda sustancia de fármaco seleccionada del grupo que consiste en agentes inmunosupresores, agente inmunomoduladores, agentes antiinflamatorios, agentes quimioterapéuticos o agentes antiinfecciosos.

6. El anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, para su uso según la reivindicación 5, en el que el anticuerpo de unión a IL-17, o uno de sus fragmentos, se coadministra, al mismo tiempo o en secuencia, con sales 10 de oro, sulfasalazina, antimaláricos, metotrexato, D-penicilamina, azatioprina, ácido micofenólico, ciclosporina A, tacrolimus, sirolimus, minociclina, leflunomida, glucocorticoides; un inhibidor de calcineurina; un modulador de la recirculación de linfocitos, por ejemplo, FTY720 y análogos de FTY720; un inhibidor de mTOR, por ejemplo, rapamicina.

4. O- (2-hidroxietil) -rapamicina, CCI779, ABT578, AP23573 o TAFA-93; una ascomicina que tiene propiedades inmunosupresoras, por ejemplo, ABT-281, ASM981, etc.; corticosteroides; ciclofosfamida; leflunomida;

mizoribina; ácido micofenólico; micofenolato mofetilo; 15-desoxiespergualina.

Figura 1. Estructura de rayos X del Fab de AIN457 Fab

Primer plano de los dominios variables del Fab de AIN457 (señal C) , destacándose las regiones determinantes de la complementariedad. Se muestran todas las cadenas laterales de tirosina aportadas por los bucles de CDR para ilustrar el hecho de que el sitio de combinación con el antígeno de AIN457 es excepcionalmente rico en restos tirosina. También se muestra la cadena lateral de Cys L97, en la interfase de VH-VL (flecha) .

Figura 2. Estructura de rayos X del Fab de AIN457, vista general

Representación de la superficie de Van der Waals del Fab de AIN457. La cadena ligera y pesada tienen un color gris claro y oscuro, respectivamente. Los bucles de CDR se destacan con diferentes colores. Nótese la presencia del gran bucle de H-CDR3 que sobresale del sitio de combinación con el antígeno del anticuerpo.