Anticuerpos e inmunoconjugados y usos para los mismos.

Polinucleótido que codifica:

(i) un anticuerpo monoclonal humanizado que se une a STEAP-1,

en el que el anticuerpo comprende una cadena pesada (HC), que comprende:

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15;

(3) una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; y

(4) una HC-FR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; y una cadena ligera (LC) que comprende:

(1) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11;

(2) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; y

(3) una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13,

en el que, opcionalmente, la cadena ligera comprende:

(1) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 90;

(2) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 91;

(3) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 92;

(4) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 93;

(5) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 94;

(6) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 95;

(7) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 96;

(8) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 97;

(9) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 98;

(10) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 99;

(11) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 100; o

(12) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 101.

Anticuerpos e inmunoconjugados y usos para los mismos

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a anticuerpos anti-STEAP-1 e inmunoconjugados de los mismos. La invención se refiere además a procedimientos de uso de anticuerpos anti-STEAP-1 e inmunoconjugados de los mismos.

ANTECEDENTES

En seres humanos, el cáncer de próstata es uno de los tumores malignos más comúnmente diagnosticados en hombres y es la segunda causa principal de muerte relacionada con cáncer en el hombre. La 15 Sociedad americana del cáncer estima que para el año 2000 se diagnosticarán 180.400 casos nuevos de cáncer de próstata con 31.900 muertes de la enfermedad. En estados avanzados, el cáncer de próstata metastatiza al hueso. Aunque se han conseguido avances en el diagnóstico temprano y el tratamiento de tumores localmente confinados, el cáncer de próstata es incurable una vez ha metastatizado. Los pacientes con cáncer de próstata metastásico en terapia hormonal desarrollarán eventualmente un estado resistente a andrógenos (independiente de andrógenos)

que conducirá a una progresión de la enfermedad y a la muerte. Actualmente, el antígeno prostático específico (PSA) es el marcador tumoral más ampliamente usado para el cribado, diagnóstico y monitorización de cáncer de próstata. Sin embargo, el uso generalizado de PSA como herramienta de cribado es controvertido ya que el PSA fracasa en discriminar con exactitud entre enfermedad de próstata benigna y maligna.

Dependiendo del estado del cáncer, el tratamiento del cáncer de próstata y de vejiga implica una o una combinación de las siguientes terapias: cirugía para extirpar el tejido cancerígeno, radioterapia, quimioterapia, privación de andrógenos (por ejemplo, terapia hormonal) en el caso de cáncer de próstata. Mientras que la terapia quirúrgica o radioterapia mejora significativamente la supervivencia en pacientes con fases tempranas de la enfermedad, las opciones terapéuticas están muy limitadas para casos avanzados, particularmente para reapariciones de tumor tras la ablación hormonal. La mayoría de los pacientes que se someten a terapia hormonal progresan para desarrollar enfermedad independiente de andrógenos. Actualmente, no hay tratamiento eficaz para el 20-40% de los pacientes con cáncer de próstata que desarrollan enfermedad recurrente después de cirugía o radioterapia, o para aquellos en los que el cáncer ha metastatizado en el momento del diagnóstico. La quimioterapia tiene sus efectos secundarios tóxicos, especialmente en pacientes ancianos. El desarrollo de nuevas formas de terapia, especialmente para enfermedad resistente a la privación de andrógenos, es una necesidad urgente en el control del carcinoma prostático.

Se ha descrito la identificación de un antígeno de superficie celular novedoso, STEAP-1 (véase la patente de EE.UU. Nº 6.329.503) . STEAP-1 es un miembro de los antígenos transmembrana de serpentina de 40 superficie celular. Se expresa predominantemente en el cáncer de próstata y, por tanto, los miembros de esta familia se han llamado “STEAP” (seis antígenos epiteliales de transmembrana de la próstata, de Six Transmembrane Epithelial Antigens of the Prostate) . Las proteínas STEAP humanas presentan un alto grado de conservación estructural dentro de la familia, pero no muestran homología estructural significativa con ninguna proteína humana conocida. Parece que STEAP-1 es una proteína membrana tipo IIIa expresada predominantemente en células de la 45 próstata en tejidos humanos normales. Estructuralmente, STEAP-1 es una proteína de 339 aminoácidos caracterizada por una topología molecular de seis dominios transmembrana y extremos N y C intracelulares, sugiriendo que se pliega en una forma de “serpentina” en tres bucles extracelulares y dos intracelulares. La expresión de proteínas STEAP-1 se mantiene a altos niveles a través de diversos estados de cáncer de próstata. STEAP-1 se expresa altamente en exceso en otros cánceres humanos tales como de pulmón y colon. Se han 50 producido anticuerpos murinos para fragmentos de STEAP-1 humana y se mostró que los anticuerpos de la publicación se unían a STEAP-1 sobre la superficie celular (véase la publicación de solicitud de patente de EE.UU. Nº 20040253232A1) . El documento WO 2005/113601 A desvela anticuerpos anti-STEAP-1 monoclonales. El documento WO 2006/034488A desvela anticuerpos modificados con cisteína.

La terapia basada en anticuerpos ha demostrado ser muy eficaz en el tratamiento de diversos cánceres. Por ejemplo, HERCEPTIN® y RITUXAN® (ambos de Genentech, S. San Francisco) se han usado satisfactoriamente para tratar cáncer de mama y linfoma no Hodgkin, respectivamente. HERCEPTIN® es un anticuerpo monoclonal humanizado derivado de ADN recombinante que se une selectivamente al dominio extracelular del proto-oncogén del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2) . La expresión en

exceso de proteínas HER2 se observa en el 25-30% de los cánceres de mama primarios. RITUXAN® es un anticuerpo monoclonal murino/humano quimérico genéticamente modificado dirigido contra el antígeno CD20 encontrado sobre la superficie de linfocitos B normales y malignos. Ambos de estos anticuerpos se producen en células CHO.

El uso de conjugados de anticuerpo-fármaco para la administración local de agente citotóxicos o citostáticos, es decir, fármacos para destruir o inhibir células tumorales en el tratamiento de cáncer (Syrigos y Epenetos (1999) Anticancer Research 19: 605-614; Niculescu-Duvaz y Springer (1997) Adv. Drg Del. Rev. 26: 151172; patente de EE.UU. 4975278) permite la administración elegida como diana del resto de fármaco a tumores, y la acumulación intracelular en los mismos, en los que la administración sistémica de estos agentes de fármaco sin conjugar puede producir niveles inaceptables de toxicidad para células normales, además de las células tumorales que se busca eliminar (Baldwin y col., (1986) Lancet pp. (15 de marzo de 1986) : 603-05; Thorpe, (1985) “Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review” en Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, A. Pinchera y col. (ed.s) , pág. 475-506) . Así se busca la máxima eficacia con la mínima toxicidad. Se ha informado de tanto anticuerpos policlonales como de anticuerpos monoclonales útiles en estas estrategias (Rowland y col., (1986) Cancer Immunol. Immunother., 21: 183-87) . Los fármacos usados en estos procedimientos incluyen daunomicina, doxorubicina, metrotrexato y vindesina (Rowland y col., Cancer Immunol. Immunother. 21: 183-87 (1986) ) . Las toxinas usadas en conjugados de anticuerpo-toxina incluyen toxinas bacterianas tales como toxina diftérica, toxinas de plantas tales como ricina, toxinas de moléculas pequeñas tales como geldanamicina (Kerr

y col. (1997) Bioconjugate Chem. 8 (6) : 781-784; Mandler y col. (2000) Journal of the Nat. Cancer Inst. 92 (19) : 15731581; Mandler y col. (2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10: 1025-1028; Mandler y col. (2002) Bioconjugate Chem. 13: 786-791) , maitansinoides (documento EP 1391213; Liu y col., (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 8618-8623) y caliqueamicina (Lode y col. (1998) Cancer Res. 58: 2928; Hinman y col. (1993) Cancer Res. 53: 33363342) . Las toxinas pueden efectuar sus efectos citotóxicos y citostáticos por mecanismos que incluyen unión a tubulina, unión a ADN o inhibición de topoisomerasa (Meyer, D.L. y Senter, P.D. “Recent Advances in Antibody Drug Conjugates for Cancer Therapy” en Annual Reports in Medicinal Chemistr y , vol. 38 (2003) Capítulo 23, 229-237) . Algunos fármacos citotóxicos tienden a ser inactivos o menos activos cuando se conjugan con anticuerpos o ligandos de receptores de proteínas grandes.

ZEVALIN® (ibritumomab tiuxetan, Biogen/Idec) es un conjugado de anticuerpo-radioisótopo compuesto por un anticuerpo monoclonal IgG1 kappa murino dirigido contra el antígeno CD20 encontrado sobre la superficie de linfocitos B normales y malignos y radioisótopo 111In o 90Y unido por un quelante de enlazador de tiourea (Wiseman y col. (2000) Eur. Jour. Nucl. Med. 27 (7) : 766-77; Wiseman y col. (2002) Blood 99 (12) : 4336-42; Witzig y col. (2002) J. Clin. Oncol. 20 (10) : 2453-63; Witzig y col. (2002) J. Clin. Oncol. 20 (15) : 3262-69) . Aunque ZEVALIN tiene actividad

contra linfoma no Hodgkin (LNH) de linfocitos B, la administración produce citopenias graves y prolongadas en la mayoría de los pacientes. MYLOTARG™ (gemtuzumab ozogamicina, Wyeth Pharmaceuticals) , un conjugado de anticuerpo-fármaco compuesto por un anticuerpo huCD33 ligado a caliqueamicina, fue aprobado en 2000 para el tratamiento de leucemia... [Seguir leyendo]

1. Polinucleótido que codifica:

(i) un anticuerpo monoclonal humanizado que se une a STEAP-1, en el que el anticuerpo comprende una cadena pesada (HC) , que comprende:

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15;

(3) una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; y

(4) una HC-FR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; y una cadena ligera (LC) que comprende:

(1) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11;

(2) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; y

(3) una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13, en el que, opcionalmente, la cadena ligera comprende:

(1) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 90;

(2) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 91;

(3) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 92;

(4) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 93;

(5) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 94;

(6) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 95;

(7) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 96;

(8) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 97;

(9) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 98;

(10) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 99;

(11) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 100; o

(12) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 101.

2. Polinucleótido, según la reivindicación 1 (i) , en el que el anticuerpo monoclonal comprende además al menos una, dos o tres regiones estructurales (FR) de HC seleccionadas entre:

(1) una HC-FR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 22;

(2) una HC-FR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; y

(3) una HC-FR4 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 24.

3. Polinucleótido, según la reivindicación 1 (i) , en el que:

(i) el anticuerpo monoclonal comprende una cadena ligera (LC) de la SEQ ID NO: 6 y/o una cadena pesada (HC) de la SEQ ID NO: 10,

(ii) el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo seleccionado entre un fragmento Fab, Fab’-SH, scFv o (Fab’) 2, o

(iii) el anticuerpo es un anticuerpo biespecífico.

4. Vector que comprende el polinucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 1-3.

5. Célula huésped que comprende el vector, según la reivindicación 4, o el polinucleótido, según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que, opcionalmente, la célula huésped es una célula de bacteria, levadura, insecto o eucariota.

6. Procedimiento de fabricación de un anticuerpo anti-STEAP-1, en el que el procedimiento comprende a) cultivar la célula huésped, según la reivindicación 5, en condiciones adecuadas para la expresión del polinucleótido que codifica el anticuerpo, y (b) aislar el anticuerpo.

7. Anticuerpo monoclonal humanizado que se une a STEAP-1, en el que el anticuerpo comprende una cadena pesada (HC) , que comprende:

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15;

(3) una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; y

(4) una HC-FR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; y una cadena ligera (LC) que comprende:

(1) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11;

(2) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; y

(3) una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13,

y en el que el anticuerpo está unido covalentemente a un marcador de detección, un marcador de captura, o un soporte sólido, en el que, opcionalmente, el marcador de detección se selecciona entre un radionucleido, un colorante fluorescente, un colorante quimioluminiscente, un resto de sustrato que desencadena bioluminiscencia, un resto de sustrato que desencadena quimioluminiscencia, y una enzima.

8. Anticuerpo monoclonal humanizado que se une a STEAP-1 para utilizar en un procedimiento para la obtención de imágenes de un tumor en un sujeto, que comprende administrar a dicho sujeto dicho anticuerpo monoclonal humanizado que se une a STEAP-1, en el que el anticuerpo comprende una cadena pesada (HC) , que comprende:

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15;

(3) una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; y

(4) una HC-FR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; y una cadena ligera (LC) que comprende:

(1) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11;

(2) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; y

(3) una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13, y detectar el anticuerpo unido a STEAP-1, o una variante alélica natural del mismo, en dicho sujeto.

9. Anticuerpo monoclonal humanizado que se une a STEAP-1 para utilizar, según la reivindicación 8, en el que el anticuerpo está unido covalentemente a un marcador de detección, en el que, opcionalmente, el marcador de detección se selecciona entre un radionucleido, un colorante fluorescente, un colorante quimioluminiscente, un resto de sustrato que desencadena bioluminiscencia, un resto de sustrato que desencadena quimioluminiscencia, y una enzima.

10. Anticuerpo monoclonal humanizado que se une a STEAP-1 para utilizar, según la reivindicación 8, en el que el tumor es un tumor de próstata, pulmón, colon, vejiga u ovario, o un sarcoma de Ewing.

11. Anticuerpo modificado con cisteína que comprende un anticuerpo monoclonal humanizado que se une a STEAP1, en el que el anticuerpo comprende una cadena pesada (HC) , que comprende:

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15;

(3) una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; y

(4) una HC-FR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; y una cadena ligera (LC) que comprende:

(1) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11;

(2) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; y

(3) una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13; en el que uno o más residuos de aminoácidos están sustituidos por uno o más aminoácidos de cisteína libre que tienen un valor de reactividad de tiol en el intervalo de 0, 6 a 1, 0.

12. Inmunoconjugado que comprende el anticuerpo modificado con cisteína, según la reivindicación 11, unido covalentemente a un agente citotóxico, en el que opcionalmente el agente citotóxico se selecciona entre una toxina, un agente quimioterapéutico, un resto de fármaco, un antibiótico, un isótopo radiactivo y una enzima nucleolítica.

13. Anticuerpo modificado con cisteína, según la reivindicación 11, en el que:

(i) el anticuerpo está unido covalentemente a un marcador de captura, un marcador de detección o un soporte sólido, o

(ii) el anticuerpo comprende una cisteína en una o más posiciones seleccionadas entre 15, 43, 110, 144, 168 y 205 de la cadena ligera, según el convenio de numeración de Kabat, y 41, 88, 115, 118, 120, 171, 172, 282, 375 y 400 se la cadena pesada según el convenio de numeración de EU.

14. Conjugado anticuerpo-fármaco:

(i) que comprende el anticuerpo modificado con cisteína, según la reivindicación 11, en el que el anticuerpo está unido covalentemente a un resto de fármaco de auristatina o maitansinoide, o

(ii) que comprende el anticuerpo modificado con cisteína, según la reivindicación 11 (Ab) , y un resto de fármaco de auristatina o maitansinoide (D) , en el que el anticuerpo modificado con cisteína está unido a través de uno o más aminoácidos de cisteína libre mediante un grupo enlazador (L) a D; teniendo el compuesto la fórmula I:

Ab- (L-D) p I

en elquep oscilade 1a 4 en el que, opcionalmente, D es MMAE, que tiene la estructura:

en la que la línea ondulada indica el punto de unión al enlazador L, o (iii) seleccionado entre las estructuras: en las que Val es valina; Cit es citrulina; p es 1, 2, 3 ó 4; y Ab es un anticuerpo anti-STEAP-1 de la reivindicación 11.

15. Formulación farmacéutica que comprende el conjugado de anticuerpo-fármaco, según la reivindicación 14 (i) , y un diluyente, portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

16. Formulación farmacéutica, según la reivindicación 15, para utilizar en un procedimiento de tratamiento del cáncer de próstata, pulmón o colon, comprendiendo el procedimiento administrar a un individuo una cantidad eficaz de la formulación farmacéutica, en la que, opcionalmente, se administra al paciente un agente quimioterapéutico en combinación con el compuesto conjugado anticuerpo-fármaco, en el que el agente quimioterapéutico se selecciona entre letrozol, cisplatino, carboplatino, taxol, paclitaxel, oxaliplatino, doxetaxel, 5-FU, leucovorina, lapatinib y gemcitabina.