ANTICUERPO ANTI-FACTOR B, COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA ÚTIL PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES DEL COMPLEMENTO Y SUS APLICACIONES.

Anticuerpo anti-factor B, composición farmacéutica útil para el tratamiento de enfermedades del complemento y sus aplicaciones.

La presente invención describe un anticuerpo anti-factor B que bloquea la generación de la convertasa del C3 de la vía alternativa útil para prevenir o modular la activación o amplificación de la activación del complemento. Una forma concreta de este anticuerpo es el anticuerpo monoclonal anti-factor B producido por el hibridoma FB-28.4.2 depositado en ACECC el 13 de noviembre de 2012 con la referencia 12111301. Además, proporciona una composición farmacéutica útil para el tratamiento de enfermedades asociadas del complemento como por ejemplo, el síndrome hemolítico urémico atípico (aHUS) o la hemoglobinuria paroxística nocturna (HPN). Igualmente, se proporciona un complejo biotecnológico útil para la realización de ensayos para la identificación y diseño de medicamentos o composiciones farmacéuticas inhibidoras del complemento.

ANTICUERPO ANTI-FACTOR B, COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA ÚTIL PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES DEL COMPLEMENTO Y SUS APLICACIONES

SECTOR DE LA INVENCION

La presente invención se circunscribe al sector de la biomedicina y, concretamente, al sector del tratamiento de pacientes con enfermedades causadas por alteraciones en el sistema del complemento, y más concretamente, en el desarrollo de inhibidores del complemento mediante herramientas biotecnológicas.

ESTADO DE LA TÉCNICA

El complemento es un componente fundamental de la inmunidad innata con papeles cruciales en la eliminación de los patógenos, en el aclaramiento de los restos apoptóticos, en el procesamiento de los inmunocomplejos y en la modulación de la respuesta inmune adaptativa. El complemento funciona como un sistema de amplificación en cascada. Su activación se inicia por tres vías, la vía clásica, la vía de las lectinas y de la vía alternativa (AP), que convergen en el paso central y más importante de la activación del complemento: la rotura de C3 para generar el fragmento activado, C3b. El paso crítico en estas vías de activación es la formación de unos complejos bimoleculares inestables con actividad proteasa, denominados C3-convertasas (C3bBb en la AP). Cuando se genera C3b, se expone un tioéster reactivo, lo que resulta en la unión covalente de C3b a la superficie activadora. La unión de C3b marca esa superficie para su destrucción y localiza sobre ella el inicio de la inflamación. La eficacia de la cascada del complemento depende del bucle de amplificación que aporta la AP C3 convertasa, ya que el C3b generado por esta convertasa forma más AP C3-convertasa y proporciona una amplificación exponencial de la activación inicial.

La generación de la AP C3-convertasa comienza in vivo con la interacción entre C3b y el factor B (FB) para formar la AP C3 pro-convertasa (C3bB). En presencia de factor D (FD), FB se escinde en dos fragmentos Bb y Ba, liberándose este último del complejo C3bB, lo que resulta en la AP C3-convertasa activa, C3bBb. FB (90 kDa) circula como una proenzima inactiva en el plasma. Se compone de cinco dominios estructurales. Tres repeticiones consenso cortas (SCRs) en el extremo N-terminal comprenden el fragmento Ba, mientras

que Bb, el fragmento grande en el extremo C-terminal, se compone de un dominio von Willebrand de tipo A (vWA), seguido de un dominio serín-proteasa (SP).

La estructura cristalina del FB humano, resuelta recientemente a una resolución de 2,3 Á, ha mostrado que el dominio Ba se extiende plegado sobre el dominio Bb [F.J. Milder, L. Gomes, A. Schouten, B.J.C. Janssen, E.G. Huizinga, R.A. Romijn, W. Hemrika, A. Roos, M.R. Daha, P. Gros, Factor B structure provides insights into activation of the central protease of the complement system, Nat Struct Mol Biol 14 (2007) 224-228], FB se une a C3b en esta conformación cerrada a través de interacciones que implican tanto al vWA, como a los dominios SCR. Después de esta interacción inicial se produce un cambio conformacional en FB, abriéndose su estructura y exponiéndose el sitio de corte por FD. Tras la escisión por FD y la liberación del fragmento Ba, el complejo entre C3b y Bb en la AP C3-convertasa C3bBb se mantiene por las interacciones entre el C345C y el dominio vWA de Bb [F.J. Milder, L. Gomes, A. Schouten, B.J.C. Janssen, E.G. Huizinga, R.A. Romijn, W. Hemrika, A. Roos, M.R. Daha, P. Gros, Factor B structure provides insights into activation of the central protease of the complement system, Nat Struct Mol Biol 14 (2007) 224-228; S.H.M. Rooijakkers, J. Wu, M. Ruyken, R. van Domselaar, K.L. Planken, A. Tzekou, D. Ricklin, J.D. Lambris, B.J.C. Janssen, J.A.G. van Strijp, P. Gros, Structural and functional implications of the alternative complement pathway C3 convertase stabilized by a staphylococcal inhibitor, Nat Immunol 10 (2009) 721-727; E. Torreira, A. Tortajada, T. Montes, S. Rodríguez de Córdoba, O. Llorca, 3D structure of the C3bB complex provides insights into the activation and regulation of the complement alternative pathway convertase, Proc Nati Acad Sci USA 106 (2009) 882-887; E. Torreira, A. Tortajada, T. Montes, S. Rodríguez de Córdoba, O. Llorca, Coexistence of Closed and Open Conformations of Complement Factor B in the Alternative Pathway C3bB(Mg2+) Proconvertase, J Immunol 183 (2009) 7347-7351; B.J.C. Janssen, L. Gomes, R.l. Koning, D.l. Svergun, A.J. Koster, D.C. Fritzinger, C.-W. Vogel, P. Gros, Insights into complement convertase formation based on the structure of the factor B- cobra venom factor complex, EMBO J 28 (2009) 2469-2478],

En situaciones normales, la activación de C3 en la sangre se mantiene a un nivel bajo y la deposición de C3b y la posterior activación del complemento se limita a la superficie de los patógenos. En enfermedades inflamatorias, la activación desregulada del complemento puede dañar los componentes celulares propios y contribuir a la patología. De hecho, el complemento está implicado en una larga lista de enfermedades [V.M. Holers, The spectrum of complement alternative pathway-mediated diseases, Immunol Rev 223 (2008) 300-316], incluyendo la artritis reumatoide (AR), lupus eritematoso sistémico (LES), glomerulonefritis,

esclerosis múltiple (EM), isquemia / repercusión. En cada una de estas enfermedades, el complemento perpetúa el "círculo vicioso" de la inflamación y exacerba el daño tisular. En los últimos años, numerosos trabajos han demostrado que la desregulación del complemento es también un factor etiológico importante en varias enfermedades. Así, las glomerulopatías por depósito aislado de C3 (C3-GP), el síndrome hemolítico urémico atípico (aHUS) y la degeneración macular asociada a la edad (AMD) son ejemplos de enfermedades causadas por la desregulación del complemento como consecuencia de mutaciones o polimorfismos en los componentes o en las proteínas reguladores de la AP C3 convertasa [Rodríguez de Córdoba S., Tortajada A., Harris CL. And Morgan P. Complement dysregulation and disease: from genes and proteins to diagnostics and drugs. Immunobiology 217 (2012) 1034-46], Hoy en día estos trastornos se consideran enfermedades prototípicas causadas por la desregulación del complemento.

Inhibir la formación de la AP C3 convertasa o disminuir su actividad sería un tratamiento eficaz para enfermedades en las que se produzca desregulación de la activación del complemento. Para ello los inventores han desarrollado un anticuerpo monoclonal (mAb) en ratón denominado FB-28.4.2 que realiza estas funciones. El mAb FB-28.4.2, sólo o en combinación con otros inhibidores de complemento, se presenta como un compuesto útil para el tratamiento de enfermedades en las que la desregulación de la AP del complemento es la causa etiológica o contribuye significativamente a la patogénesis.

EXPLICACIÓN DE LA INVENCIÓN

Descripción Breve

Un primer objeto de la invención lo constituye un anticuerpo anti-factor B que bloquea la generación de la convertasa del C3 de la vía alternativa útil para prevenir o modular la activación o amplificación de la activación del complemento, en adelante anticuerpo antifactor B de la invención, que es capaz de reconocer específicamente un epítopo en el fragmento Ba del factor B y cuya secuencia aminoacídica de la cadena pesada presenta un porcentaje de homología de al menos el 95% respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID N01 y/o cuya secuencia aminoacídica de la región variable de la cadena pesada presenta un porcentaje de homología de al menos el 95% respecto a la secuencia aminoacídica la SEQ ID N04.

Un objeto preferente de la invención lo constituye el anticuerpo anti-factor B de la invención donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal producido por un hibridoma.

Una realización particular de la invención lo constituye el anticuerpo monoclonal anti-factor B de la invención que está producido por el hibridoma FB-28.4.2 depositado en ACECC el 13 de noviembre de 2012 con la referencia 12111301.

Otra realización particular de la invención lo constituye el anticuerpo anti-factor B de la invención constituido por un fragmento del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma FB-28.4.2 depositado en ACECC el 13 de noviembre de 2012 con la referencia 12111301.

Otro objeto de la invención es el hibridoma FB-28.4.2 depositado en ACECC el 13 de noviembre de 2012 con la referencia 12111301, que se caracteriza por producir el anticuerpo FB-28.4.2, de ahora en adelante hibridoma de la invención.

Otro objeto de la invención lo constituye el uso del hibridoma para la producción del anticuerpo monoclonal anti-factor B de la invención.

Otro objeto de la invención lo constituye una composición farmacéutica antagonista del factor B del complemento útil... [Seguir leyendo]

1.- Anticuerpo anti-factor B que bloquea la generación de la convertasa del C3 de la vía alternativa útil para prevenir o modular la activación o amplificación de la activación del complemento caracterizado por que es capaz de reconocer específicamente un epítopo en el fragmento Ba del factor B y cuya secuencia aminoacídica de la cadena pesada presenta un porcentaje de homología de al menos el 95% respecto a la secuencia aminoacídica SEQ ID N01 y/o cuya secuencia aminoacídica de la región variable de la cadena pesada presenta un porcentaje de homología de al menos el 95% respecto a la secuencia aminoacídica la SEQ ID N04.

2.- Anticuerpo antl-factor B según la reivindicación 1 caracterizado por que es un anticuerpo monoclonal producido por un hibridoma.

3.- Anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 1 caracterizado por que está producido por el hibridoma FB-28.4.2 depositado en ACECC el 13 de noviembre de 2012 con la referencia 12111301.

4.- Anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 1 caracterizado por que comprende las regiones de reconocimiento del antígeno variables y/o hipervariables de las cadenas ligeras y/o pesadas, o bien de las propias cadenas ligeras y/o pesadas del anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 3.

5.- Anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 1 caracterizado por que comprende en la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada la SEQ ID N01.

6.- Anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 1 caracterizado por que comprende en la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada la SEQ ID N04.

7.- Anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 1 caracterizado por que está constituido por un fragmento del anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma FB-28.4.2 depositado en ACECC el 13 de noviembre de 2012 con la referencia 12111301.

8.- Anticuerpo anti-factor B según la reivindicación 7 caracterizado por que el fragmento es un fragmento Fab producido por digestión con papaína.

9.- Hibridoma FB-28.4.2 depositado en ACECC el 13 de noviembre de 2012 con la referencia 12111301.

10.- El uso del hibridoma según la reivindicación 9 para la producción del anticuerpo monoclonal anti-factor B según la reivindicación 3.

11.- Uso de un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 8 en la elaboración de un medicamento o una composición farmacéutica para el tratamiento de un desorden o una enfermedad asociada al complemento.

12.- Composición farmacéutica antagonista del factor B del complemento útil para el tratamiento de una enfermedad asociada del complemento caracterizada por que comprende el anticuerpo anti-factor B según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 8 con portadores farmacéuticamente aceptables.

13.- Composición farmacéutica según la reivindicación 12 caracterizada por que la enfermedad asociada al complemento pertenece al siguiente grupo: artritis reumatoide (AR), lupus eritematoso sistémico (LES), glomerulonefritis, esclerosis múltiple (EM), isquemia / repercusión, glomerulopatías por depósito aislado de C3 (C3G), síndrome hemolítico urémico atípico (aHUS), enfermedad hemoglobinuria paroxística nocturna (HPN) y degeneración macular asociada a la edad (AMD).

14.- Uso de la composición farmacéutica según las reivindicaciones 12 y 13 útil en una cantidad terapéuticamente eficaz para el tratamiento de una enfermedad asociada al complemento.

15.- Uso de la composición farmacéutica según la reivindicación 14 caracterizado por que la enfermedad asociada al complemento perteneciente al siguiente grupo: artritis reumatoide (AR), lupus eritematoso sistémico (LES), glomerulonefritis, esclerosis múltiple (EM), isquemia / repercusión, glomerulopatías por depósito aislado de C3 (C3G), síndrome hemolítico urémico atípico (aHUS), enfermedad hemoglobinuria paroxística nocturna (HPN) y degeneración macular asociada a la edad (AMD).

16.- Uso de la composición según las reivindicaciones 14 y 15 caracterizado por que la composición farmacéutica puede administrase en combinación con otros agentes terapéuticos.

17.- Complejo biotecnología) útil para la realización de ensayos biotecnológicos caracterizado por que comprende el factor B y el anticuerpo anti-factor B según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 8.

18.- Uso de! anticuerpo anti-factor B según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 8

para la elaboración del complejo biotecnológico según la reivindicación 17.

19.- Uso de! complejo biotecnológico de la reivindicación 17 en la elaboración de ensayos biotecnológicos para la identificación y diseño de medicamentos o composiciones 10 farmacéuticas inhibidoras de la formación de la convertasa de! C3 de la vía alternativa y de la activación de! complemento.