Compuestos pirroles como inhibidores de proteínas cinasas ERK y composiciones farmacéuticas que contienen esos compuestos.

Un compuesto de fórmula I:**Fórmula**

o una de sus sales farmacéuticamente aceptables,

en el cual:

R1 es un grupo C1-6 alifático, en el que R1 está opcionalmente sustituido con hasta 2 grupos elegidos independientemente entre -OR o -C1-3 haloalquilo;

cada R es independientemente hidrógeno o C1-4 alifático;

R2 es R, fluoro o cloro;

m es 0, 1 o 2; y

R3 es hidrógeno, C1-3 alifático, fluoro o cloro.

Compuestos pirroles como inhibidores de proteínas cinasas ERK y composiciones farmacéuticas que contienen esos compuestos Ã?rea técnica de la invención La presente invención se refiere a compuestos útiles como inhibidores de las proteínas cinasas. La invención también proporciona composiciones farmacéuticamente aceptables que contienen los compuestos de la invención y métodos de uso de las composiciones en el tratamiento de diversos trastornos.

Antecedentes de la invención La búsqueda de nuevos agentes terapéuticos se ha visto auxiliada en gran medida en los últimos años por una mejor comprensión de la estructura de las enzimas y otras biomoléculas asociadas a enfermedades que son el objetivo. Una clase importante de enzimas que ha sido objeto de un extenso estudio es la de las proteínas cinasas.

Las proteínas cinasas constituyen una gran familia de enzimas relacionadas estructuralmente que son responsables del control de diversos procesos de transducción de la señal dentro de la célula. (Véase, Hardie, G. y Hanks, S. (1995) The Protein Kinase Facts Book, I y II, Academic Press, San Diego, CA) . Se cree que las proteínas cinasas han evolucionado de un gen ancestral común debido a la conservación de su estructura y función catalítica. Casi todas las cinasas tienen un dominio catalítico similar de 250 a 300 aminoácidos. Las cinasas se pueden categorizar en familias por los sustratos a los que fosforilan (p. ej., proteína-tirosina, proteína-serina/treonina, lípidos, etc.) . Se han identificado motivos de secuencia que corresponden generalmente a los de cada una de esas familias de cinasas (véase, por ejemplo, Hanks, S.K., Hunter, T., FASEB J., 9:576-596 (1995) ; Knighton et al., Science, 253:407-414 (1991) ; Hiles et al., Cell, 70:419-429 (1992) ; Kunz et al., Cell, 73:585-596 (1993) ; Garcia-Bustos et al., EMBO J., 13:2352-2361 (1994) ) .

En general, las proteínas cinasas actúan de mediadores en la señalización intracelular al efectuar una transferencia de fosforilo desde un nucleósido trifosfato a un aceptor de proteína que está implicado en una vía de señalización. Estas fosforilaciones actúan como interruptores moleculares de encendido/apagado que pueden modular o regular la función biológica de la proteína diana. Estas fosforilaciones son en última instancia activadas en respuesta a diversos estímulos extracelulares y otros. Los ejemplos de dichos estímulos incluyen señales de estrés ambiental y químico (por ej., shock osmótico, shock de calor, radiación ultravioleta, endotoxina bacteriana y H2O2) , citocinas (por ej., interleucina-1 (IL-1) y factor de necrosis tumoral a (TNF-a) ) , y factores de crecimiento (por ej., factor estimulante de las colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) y factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) ) . Un estímulo extracelular puede afectar a una o más respuestas celulares relacionadas con la multiplicación celular, la migración, la diferenciación, la secreción de hormonas, la activación de los factores de transcripción, la contracción muscular, el metabolismo de la glucosa, el control de la síntesis de proteínas y la regulación del ciclo celular.

Muchas enfermedades están asociadas a respuestas celulares anómalas activadas por acontecimientos mediados por proteínas cinasas. Estas enfermedades incluyen enfermedades autoinmunitarias, enfermedades inflamatorias, osteopatías, enfermedades metabólicas, neuropatías y enfermedades neurodegenerativas, cáncer, enfermedades cardiovasculares, alergias y asma, enfermedad de Alzheimer y enfermedades hormonales. En consecuencia, se ha hecho un esfuerzo importante en la química medicinal por encontrar inhibidores de las proteínas cinasas que sean eficaces como agentes terapéuticos. No obstante, considerando la ausencia de opciones de tratamiento disponibles en la actualidad para la mayoría de las afecciones asociadas a la proteínas cinasas, existe todavía una gran necesidad de nuevos agentes terapéuticos que inhiban estas proteínas diana.

Las células de mamíferos responden a estímulos extracelulares activando cascadas de señalización que son mediadas por miembros de la familia de las proteínas cinasas activadas por mitógenos (MAP) , que incluyen las cinasas reguladas por señal extracelular (ERK) , las cinasas p38 MAP y las cinasas c-Jun N-terminal (JNK) . Las cinasas MAP (MAPK) son activadas por diversas señales que incluyen factores de crecimiento, citocinas, radiación UV e inductores de estrés. Las MAPK son serina/treonina cinasas y su activación se produce por fosforilación dual de treonina y tirosina en el segmento Thr-X-Tyr del bucle de activación. Las MAPK fosforilan varios sustratos incluidos factores de transcripción, que a su vez regulan la expresión de conjuntos de genes específicos y así median una respuesta específica al estímulo.

ERK2 es una proteína cinasa ampliamente distribuida que alcanza su máxima actividad cuando tanto Thr183 como Tyr185 son fosforiladas por la MAP cinasa cinasa, MEK1 (Anderson et al., 1990, Nature 343, 651; Crews et al., 1992, Science 258, 478) . Luego de la activación, ERK2 fosforila muchas proteínas reguladoras, incluidas las proteínas cinasas Rsk90 (Bjorbaek et al., 1995, J. Biol. Chem. 270, 18848) y MAPKAP2 (Rouse et al., 1994, Cell 78, 1027) , y factores de transcripción como ATF2 (Raingeaud et al., 1996, Mol. Cell Biol. 16, 1247) , Elk-1 (Raingeaud et al. 1996) , c-Fos (Chen et al., 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 10952) y c-Myc (Oliver et al., 1995, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 210, 162) . ERK2 también es un objetivo posterior de las rutas dependientes de Ras/Raf (Moodie et al., 1993, Science 260, 1658) y trasmite las señales de estas proteínas potencialmente oncógenas. Se ha demostrado

que ERK2 desempeña un papel fundamental en el control negativo de la multiplicación de las células del cáncer de mama (Frey y Mulder, 1997, Cancer Res. 57, 628) y se ha informado de hiperexpresión de ERK2 en cáncer de mama humano (Sivaraman et al., 1997, J Clin. Invest. 99, 1478) . También se ha implicado a ERK2 activada en la proliferación de células de músculo liso estimuladas por endotelina en las vías respiratorias, lo que sugiere un papel de esta cinasa en el asma (Whelchel et al., 1997, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 16, 589) .

La sobreexpresión de receptores tirosina cinasas como EGFR y ErbB2 (Arteaga CL, 2002, Semin Oncol. 29, 3-9; Eccles SA, 2001, J Mammar y Gland Biol Neoplasia 6:393-406; Mendelsolm J & Baselga J, 2000, Oncogene 19, 6550-65) , así como mutaciones activantes en las proteínas Ras GTPasas (Nottage M & Siu LL, 2002, Curr Pharm Des 8, 2231-42; Adjei AA, 2001, J Natl Cancer Inst 93, 1062-74) o los mutantes B-Raf (Davies H. et al., 2002, Nature 417, 949-54; Brose et al., 2002, Cancer Res 62, 6997-7000) son importantes contribuyentes al cáncer humano. Estas alteraciones genéticas se correlacionan con un mal pronóstico clínico y resultan en la activación de la cascada de transducción de señal Raf-1/2/3 - MEK1/2 - ERK1/2 en un amplio grupo de tumores humanos. ERK activada (es decir ERK1 y/o ERK2) es una molécula de señalización central que ha sido asociada al control de la proliferación, la diferenciación, la supervivencia celular independiente del anclaje y la angiogénesis, contribuyendo a varios procesos que son importantes para la formación y el avance de los tumores malignos. Estos datos sugieren que un inhibidor de ERK1/2 ejercerá actividad pleiotrópica, por ejemplo efectos preapoptóticos, antiproliferativos, antimetastásicos y antiangiogénicos, y ofrecerá una oportunidad terapéutica contra un amplio grupo de tumores humanos.

Existe un creciente cuerpo de evidencia que implica la activación constitutiva de la ruta ERK MAPK en el comportamiento oncógeno de determinados cánceres. Se encuentran mutaciones activantes de Ras en ∼30% de todos los cánceres, con algunos, como cáncer pancreático (90%) y de colon (50%) , que ostentan tasas particularmente altas de mutación (ref) . También se han identificado mutaciones de Ras en 9-15% de los melanomas, pero las mutaciones somáticas de sentido erróneo en B-Raf que confieren activación constitutiva son más frecuentes y se encuentran en 60-66% de los melanomas malignos. Las mutaciones activantes de Ras, Raf y MEK son capaces de transformar oncógenamente los fibroblastos in vitro, y las mutaciones de Ras o Raf conjuntamente con la pérdida de un gen supresor de tumores (por ej. p16INK4A) pueden causar un desarrollo espontáneo del tumor in vivo. Se ha demostrado una mayor actividad de ERK en estos modelos y también ha sido comunicada ampliamente en tumores humanos apropiados. En el melanoma, la elevada actividad basal de ERK resultante de las mutaciones B-Raf o N-Ras o la activación del factor de crecimiento... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de fórmula I:

o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en el cual:

R1 es un grupo C1-6 alifático, en el que R1 está opcionalmente sustituido con hasta 2 grupos elegidos independientemente entre -OR o -C1-3 haloalquilo; cada R es independientemente hidrógeno o C1-4 alifático;

R2 es R, fluoro o cloro; m es 0, 1 o 2; y R3 es hidrógeno, C1-3 alifático, fluoro o cloro.

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R1 es un grupo C1-4 alifático opcionalmente sustituido 15 con -OR o -C1-3 haloalquilo.

3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, en el que R1 es un grupo C1-4 alifático opcionalmente sustituido con -OH, -CHF2, -CH2F o -CF3.

4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 3, en el que R1 es isopropilo, 2-butilo, ciclopropilo o etilo, donde cada grupo está opcionalmente sustituido con -OH o -CF3.

5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R2 es hidrógeno, C1-3 alifático o cloro.

6. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R3 es hidrógeno, metilo o cloro.

7. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, elegido del grupo que consiste en:

8. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que:

R1 es isopropilo o 2-butilo, donde R1 está opcionalmente sustituido con un -OH;

R2 es H o Cl; m es 1; y R3 es Cl o metilo.

9. Un compuesto que tiene la estructura siguiente:

10. Una composición que contiene un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 y un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable.

11. Un método de inhibición de la actividad de la proteína cinasa ERK2 en una muestra biológica in vitro, donde dicha muestra biológica se elige entre un cultivo celular, material de biopsia obtenido de un mamífero, saliva, orina,

heces, semen, lágrimas, o sus extractos, donde el método comprende poner en contacto dicha muestra biológica con un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 o una composición de acuerdo con la reivindicación 10.

12. Una composición de acuerdo con la reivindicación 10, o un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para tratar o atenuar la gravedad de una enfermedad, una afección o un trastorno en un paciente, seleccionado entre melanoma, cáncer de colon, cáncer pancreático, carcinoma renal, cáncer de pulmón, cáncer de ovario o cáncer de próstata.

13. El uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una composición de acuerdo con la reivindicación 10, en la fabricación de un medicamento destinado a tratar o atenuar la gravedad de una enfermedad, una afección o un trastorno en un paciente, seleccionado entre melanoma, cáncer de colon, cáncer pancreático, carcinoma renal, cáncer de pulmón, cáncer de ovario o cáncer de próstata.