USO DEL FACTOR DE CRECIMIENTO DERIVADO DE PLAQUETAS PARA EL TRATAMIENTO DE LAS CALCIFICACIONES VASCULARES.

La presente invención describe el uso del factor de crecimiento derivado de plaquetas o cualquiera de sus análogos,

fragmentos o variantes biológicamente activas, en la elaboración de un medicamento para la prevención o el tratamiento de la calcificación vascular.

Uso del factor de crecimiento derivado de plaquetas para el tratamiento de las calcificaciones vasculares.

La presente invención se encuentra dentro del campo de la medicina y la farmacia, y se refiere a el uso del factor de crecimiento derivado de plaquetas para la elaboración de un medicamento o composición farmacéutica dirigida a combatir la calcificación de los vasos sanguíneos y especialmente al tratamiento de las calcificaciones vasculares asociadas al tratamiento con calcitriol.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR

La enfermedad cardiovascular es la causa principal de muerte en pacientes con insuficiencia renal crónica (IRC) . Los pacientes en hemodiálisis presentan aterosclerosis y arteriosclerosis. Estas enfermedades vasculares se empiezan a desarrollar en los estadios tempranos de la enfermedad renal, y conforme la enfermedad renal progresa, se produce un empeoramiento progresivo de la enfermedad cardiovascular. La afección cardiovascular de los pacientes con insuficiencia renal avanzada se caracteriza por calcificaciones en el ámbito de las capas íntima y media de la pared arterial. Las calcificaciones de las arterias producen disminución de la elasticidad de los vasos y el grado de calcificación se correlaciona con mortalidad.

Durante muchos años, se consideró que las calcificaciones vasculares de los pacientes con insuficiencia renal se debían a la deposición pasiva de sales de calcio, consecuencia de una sobresaturación por el aumento de las concentraciones plasmáticas de calcio y fósforo (aumento del producto Ca x P) . Indudablemente, la hiperfosfatemia y el aumento del producto Ca x P contribuyen de forma importante a la calcificación vascular. La hiperfosfatemia es un predictor de mortalidad, posiblemente por su papel en la patogenia de las calificaciones. Para prevenir las calcificaciones vasculares en los pacientes renales, es esencial controlar el fosfato plasmático sin aportar un exceso de calcio, es decir, evitando utilizar quelantes intestinales de fósforo que contengan calcio.

Sin embargo, en la actualidad, se sabe que la calcificación vascular es un proceso activo regulado en el ámbito celular y por ciertos componentes del plasma, como son ciertas proteínas y otros factores patogénicos.

Por tanto, hay proteínas que regulan la calcificación vascular, favoreciéndola o inhibiéndola. Es evidente que en los pacientes con patologías renales los mecanismos inhibidores son superados por los otros mecanismos que promueven la calcificación vascular, con lo que se produce un desequilibrio.

Entre las proteínas que modulan la calcificación extraósea se encuentran:

Matrix gla-protein Es una proteína extracelular que tiene afinidad por la hidroxiapatita. En el hueso, favorece la formación ósea y, en la arteria, inhibe la calcificación. La matrix gla-protein (MGP) es dependiente de la vitamina K y su función se afecta por la warfarina o acenocumarol. La MGP inhibe la actividad de la bone matrix protein 2a (BMP2a) , que es una proteína procalcificante. Se ha comprobado que un ratón deficiente en MGP muestra calcificaciones arteriales difusas.

Fetuína Es la glucoproteína a2-Heremans-Schmid (Ahsg) o fetuína A. Esta proteína sérica es un importante inhibidor de las calcificaciones extraóseas. La concentración de fetuína disminuye en situaciones de inflamación (respuesta celular inmunitaria) . Esta proteína disminuye la precipitación de calcio y fósforo in vitro. Se ha visto que un ratón deficiente en fetuína muestra calcificaciones arteriales difusas. La importancia clínica de la fetuína quedó ilustrada en un trabajo que demostró una asociación entre mortalidad cardiovascular y valores bajos de fetuína en pacientes en hemodiálisis. Se ha descrito que el complejo proteico fetuína/MGP inhibe la precipitación de sales de calcio y la formación de hidroxiapatita. También parece que la inhibición de la calcificación por fetuína depende de la formación de complejos proteicos estables que incorporan los núcleos de mineral.

Osteoprotegerina En el hueso la interacción de osteoprotegerina (OPG-L) con su receptor RANK (del inglés receptor-activator of NF-KB) regula la diferenciación, la activación y la apoptosis de los osteoclastos. Se ha visto que en ratones deficientes en OPG, se produce osteoporosis y calcificación arterial.

Osteopontina Es un potente inhibidor de la deposición de hidroxiapatita en cultivos de células de músculo liso vascular (VSMC) . Además, protege a las células endoteliales de la apoptosis que se produce por deprivación de factores de crecimiento. Las proteínas más importantes que favorecen la calcificación son la fosfatasa alcalina, la osteonectina, la osteocalcina y el BMP2. Estas proteínas se expresan en abundancia en pared vascular calcificada y en cultivos de células de músculo liso vascular en los que se inducen calcificaciones.

Entre los factores patogénicos se encuentran:

Hiperfosfatemia El aumento de la concentración de fósforo en el medio en cultivos de VSMC induce la calcificación de estas células. Para que el fósforo induzca la calcificación de las VSMC, necesita que haya un transporte activo desde fuera al interior de la célula (Pit-1) , y que subsecuentemente se induzca el Cbfa-1, factor de transcripción específico de osteoblastos que regula la expresión de proteínas procalcificantes. Se ha observado que usando ácido fosfonomórfico (PFA) se puede evitar el transporte celular del fósforo. El efecto calcificante del fósforo, necesita una alteración previa de la pared vascular que facilite o promueva la transformación fenotípica de las VSMC hacia osteoblasto.

Uremia Estudios realizados in vitro con VSMC demuestran que el suero urémico es capaz de inducir su calcificación, de forma independiente de la concentración de fósforo. En las arterias calcificadas de los pacientes urémicos, hay un aumento de expresión del Cbfa-1 en el ámbito de las capas media e íntima.

Hipercalcemia También se ha demostrado que un aumento de la concentración de calcio ejerce un efecto estimulador directo en la calcificación. En cultivos de VSMC, la concentración elevada de induce calcificación incluso cuando el fósforo no está aumentado. Al igual que el fósforo, el calcio elevado también estimula la expresión del transportador Na-P (Pit-1) , y la inhibición de este transportador inhibe la calcificación inducida por el calcio. También el calcio elevado induce expresión de Cbfa-1. La hiperfosforemia y la hipercalcemia inducen calcificaciones vasculares de forma independiente, pero conjuntamente ejercen un efecto sinérgico que favorece las calcificaciones vasculares. Es importante señalar que, en presencia de un fósforo elevado, un pequeño aumento de calcio supone una calcificación exagerada.

Microvesículas El primer paso en el proceso de calcificación es la acumulación de calcio y fósforo en vesículas que proceden de la apoptosis de VSMC (cuerpos apoptóticos) , o que son liberadas por células de la pared vascular de estirpe osteoblástica que expresan el Cbfa-1 (matrix vesicles) .

Además de estos factores, existen fármacos que inducen las calcificaciones vasculares. Así, el calcitriol (DCI) o 1-alpha, 25-dihidroxicolecalciferol (abreviado 1, 25- (OH) 2D3) es la forma activa de la vitamina D que se encuentra en el cuerpo (vitamina D3) . Se utiliza para tratar el hiperparatiroidismo secundario en los pacientes urémicos. Pero el calcitriol aumenta la absorción intestinal de calcio y fósforo, y produce hipercalcemia e hiperfosfatemia, lo cual puede favorecer la calcificación vascular. El peligro de calcificación por vitamina D es mayor si se administra a pacientes con hiperfosfatemia que se están tratando simultáneamente con quelantes de fósforo que contienen calcio. Además, algunos autores han encontrado que el calcitriol estimula la calcificación vascular por acción directa en la pared vascular.

En la actualidad, se pueden utilizar en el tratamiento del hiperparatiroidismo secundario otros análogos de la vitamina D, como el paricalcitol o el 22-oxacalcitriol (OCT) , que sin dejar de inhibir la PTH, parecen tener menos efecto en la absorción intestinal de calcio y fósforo. En un estudio reciente, se ha mostrado una mortalidad menor en pacientes en hemodiálisis que están siendo tratados con paricalcitol, comparados con los tratados con calcitriol. Una de las posibles razones que expliquen el efecto beneficioso del paricalcitol en la mortalidad puede ser un menor efecto hipercalcémico e hiperfosfatémico.

Una alternativa al tratamiento con calcitriol es el uso de calcimiméticos, activadores alostéricos del receptor de calcio (RCa) , que desde hace unos años se utiliza para el control del hiperparatiroidismo... [Seguir leyendo]

1. Uso del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) , o cualquiera de sus análogos, fragmentos o variantes biológicamente activas, en la elaboración de un medicamento para la prevención o el tratamiento de la calcificación vascular.

2. El uso del factor de crecimiento derivado de plaquetas o cualquiera de sus análogos, fragmentos o variantes biológicamente activas según la reivindicación anterior, donde la calcificación vascular es inducida por el tratamiento con al menos un agonista de los receptores de vitamina D.

3. El uso del factor de crecimiento derivado de plaquetas según la reivindicación 2, donde el agonista de los receptores de vitamina D se selecciona de la lista que consiste en calcitriol, paricalcitol, doxercalciferol y maxacalcitol.

4. El uso del factor de crecimiento derivado de plaquetas o cualquiera de sus análogos, fragmentos o variantes biológicamente activas según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde el factor de crecimiento derivado de plaquetas o cualquiera de sus análogos, fragmentos o variantes biológicamente activas se encuentra unido a un aptámero.

5. El uso del factor de crecimiento derivado de plaquetas según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde el factor de crecimiento derivado de plaquetas o cualquiera de sus análogos, fragmentos o variantes biológicamente activas se encuentra en una solución o suspensión, y la vía de administración es la vía parenteral.

6. El uso del factor de crecimiento derivado de plaquetas según la reivindicación anterior, donde la vía de administración es la vía intravenosa.

7. El uso de una composición farmacéutica que comprende el factor de crecimiento derivado de plaquetas o cualquiera de sus análogos, fragmentos o variantes biológicamente activas según se describe en las reivindicaciones 1-6, y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la elaboración de un medicamento para la prevención o el tratamiento de la calcificación vascular.

8. Una composición farmacéutica que comprende el factor de crecimiento derivado de plaquetas, o cualquiera de sus análogos, fragmentos o variantes biológicamente activas, y al menos un agonista de los receptores de vitamina D, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

9. La composición farmacéutica según la reivindicación anterior, donde el agonista de los receptores de vitamina D se selecciona de la lista que consiste en calcitriol, paricalcitol, doxercalciferol y maxacalcitol.

10. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 8-9, donde el agonista de los receptores de vitamina D es el calcitriol.

11. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 8-10, que además comprende angiotensina II.

12. Forma farmacéutica que comprende una composición según cualquiera de las reivindicaciones 7-11.

13. Una preparación combinada que comprende como principios activos el factor de crecimiento derivado de plaquetas o cualquiera de sus análogos, fragmentos o variantes biológicamente activas, y al menos un agonista de los receptores de vitamina D.

14. La preparación combinada según la reivindicación 13, donde el agonista de los receptores de vitamina D se selecciona de la lista que consiste en calcitriol, paricalcitol, doxercalciferol y maxacalcitol.

15. La preparación combinada según cualquiera de las reivindicaciones 13-14, donde el agonista de los receptores de vitamina D es el calcitriol.

16. La preparación combinada según cualquiera de las reivindicaciones 13-15, que además comprende angiotensina II.

17. El uso por separado, simultáneo o secuencial de los principios activos de la preparación combinada según cualquiera de las reivindicaciones 13-16, en la elaboración de un medicamento.

18. El uso por separado, simultáneo o secuencial de los principios activos de la preparación combinada según cualquiera de las reivindicaciones 13-16, en la elaboración de un medicamento para la prevención o el tratamiento de la calcificación vascular.

Fig. 1A

Fig. 1B Fig. 2

2 lavados con PBS

Células al finalizar el experimento

Cuantificación de calcio por el método o-cresolphthaleinacomplexona Cuantificación de proteína por el método Bradford

Normalización de la cantidad de calcio con la Proteína

Fig. 3

Desmineralización con HCl0, 6N durante 12 h

lavados con PBS, solubilización de las células con NaOH 0, 1M-SDS 0, 1% y levantamiento por elmétodo de raspado 3, 0 2, 5 2, 0 1, 5 1, 0 0, 5 0 Control P P+A º10-11M P+A 10-9M P+A 10-7M P+A º10-5M P+A 10-4M

* * * a * p<0.01 vs P * * a p<0.01 vs Control

Fig. 4

a p<0.01 vs Control *p<0.01 vs P # p<0.01 vs P+CTR10-8M

*

4, 0 a 3, 0

* p<0.01 vs P a p<0.01 vs control

2, 5

2, 0

* *

1, 5 *

1, 0

0, 5

Control P P+PDGF 20 P+PDGF 40 P+PDGF 80

Fig. 6

a p<0.01 vs Control *p<0.01 vs P # p<0.01 vs P+CTR10-8M