Polipéptidos de acción prolongada y métodos para producirlos y administrarlos.

Un polipéptido que comprende un péptido de interés, en el que un primer péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica está unido con el extremo amino terminal de dicho péptido de interés,

y un segundo y tercer péptidos carboxilo terminales de gonadotropina coriónica están unidos con el extremo carboxilo terminal de dicho péptido de interés, en el que el péptido carboxilo terminal de gonadotropina es de la subunidad beta de la gonadotropina coriónica humana y comprende la secuencia de aminoácidos SSSSKAPPPS, en el que dicho péptido de interés es un péptido de la hormona del crecimiento, y en el que dicho péptido de la hormona del crecimiento muestra actividad hGH y es al menos 50 % homólogo de la secuencia expuesta en SEC ID Nº: 47

Polipéptidos de acción prolongada y métodos para producirlos y administrarlos Campo de la invención La invención se refiere a polipéptidos, y polinucleótidos que los codifican, que comprenden péptidos carboxilo terminales (CTP) de gonadotropina coriónica unidos con un péptido de la hormona del crecimiento. También se desvelan composiciones farmacéuticas que comprenden los polipéptidos y polinucleótidos de la invención y usos de los mismos.

Antecedentes de la invención Los polipéptidos son susceptibles de desnaturalización o degradación enzimática en la sangre, hígado o riñón. En consecuencia, los polipéptidos típicamente tienen semividas en circulación cortas de varias horas. Debido a su baja estabilidad, los fármacos peptídicos se suministran habitualmente en una frecuencia sostenida para mantener una concentración en plasma eficaz del péptido activo. Además, ya que los fármacos peptídicos se administran habitualmente por infusión, la inyección frecuente de fármacos peptídicos provoca una incomodidad considerable a un sujeto. Por lo tanto, existe la necesidad de tecnologías que prolonguen las semividas de polipéptidos terapéuticos manteniendo a la vez una alta eficacia farmacológica de los mismos. Dichos fármacos peptídicos deseables también deberían cumplir los requisitos de estabilidad en suero potenciada, alta actividad y una baja probabilidad de inducir una respuesta inmunitaria indeseada cuando se inyecten a un sujeto.

La farmacocinética desfavorable, tal como una semivida en suero corta, puede evitar el desarrollo farmacéutico de muchos candidatos farmacológicos de otro modo prometedores. La semivida en suero es una característica empírica de una molécula, y debe determinarse de forma experimental para cada nuevo fármaco potencial. Por ejemplo, con fármacos polipeptídicos de menor peso molecular, los mecanismos de eliminación fisiológicos tales como filtración renal pueden hacer el mantenimiento de niveles terapéuticos de un fármaco inviable debido al coste o la frecuencia del régimen de dosificación requerido. Por el contrario, una semivida en suero prolongada es indeseable cuando un fármaco o sus metabolitos tienen efectos secundarios tóxicos.

Sumario de la invención La presente invención proporciona un polipéptido que comprende un péptido de interés, en el que se une un primer péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica con el extremo amino terminal de dicho péptido de interés, y se unen un segundo y tercer péptidos carboxilo terminales de gonadotropina coriónica con el extremo carboxilo terminal de dicho péptido de interés, en el que el péptido carboxilo terminal de gonadotropina es de la subunidad beta de gonadotropina coriónica humana y comprende la secuencia de aminoácidos SSSSKAPPPS, en el que dicho péptido de interés es un péptido de la hormona del crecimiento, y en el que dicho péptido de la hormona del crecimiento muestra actividad de la hormona del crecimiento humana (hGH) y es al menos 50 % homólogo de la secuencia expuesta en SEC ID Nº : 47.

El péptido de la hormona del crecimiento de interés puede ser glucosilado o no glucosilado.

El al menos un péptido carboxilo terminal (CTP) de gonadotropina coriónica puede ser glucosilado.

En una realización, la secuencia del péptido de la hormona del crecimiento puede comprender una secuencia de aminoácidos seleccionada de las secuencias expuestas en SEC ID Nº : 39-41.

En una realización, la secuencia de al menos un péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica puede comprender una secuencia de aminoácidos seleccionada de la secuencias expuestas en SEC ID Nº : 17 y SEC ID Nº : 18.

En una realización, el al menos un péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica puede estar truncado, y el péptido carboxilo terminal truncado puede comprender al menos un sitio de glucosilación.

El polipéptido puede comprender además un péptido señal, que puede comprender una secuencia de aminoácidos como se expone en SEC ID Nº : 19.

El al menos un péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica puede unirse con el polipéptido de crecimiento mediante un enlazador. En una realización, el enlazador puede ser un enlace peptídico.

La invención proporciona además un polinucleótido que codifica el polipéptido de la invención. En diversas realizaciones, la secuencia del polinucleótido puede seleccionarse de las secuencias expuestas en SEC ID Nº : 44

46. El polinucleótido puede codificar un polipéptido que comprende un péptido señal, por ejemplo que tiene una secuencia de aminoácidos como se expone en SEC ID Nº : 19.

La invención también proporciona un vector de expresión que comprende el polinucleótido de la invención, así como una célula que comprende el vector de expresión.

La invención proporciona además una composición farmacéutica que comprende el polipéptido de la invención como se describe en una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, el polinucleótido de la invención como se describe en una cualquiera de las reivindicaciones 14-17, el vector de expresión de la invención como se describe en la reivindicación 18, o la célula de la invención como se describe en la reivindicación 19, o su combinación.

En los ejemplos, los inventores han demostrado aumento del crecimiento en ratas hipofisectomizadas, que no tienen secreción de la hormona del crecimiento, después de inyecciones de CTP-hGH. Por lo tanto, la invención proporciona el uso de un polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12 o un polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 14-17 para la preparación de un medicamento para tratar una afección del crecimiento, relacionada con el peso o metabólica. La invención también proporciona un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-12 o un polinucleótido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14-17 para su uso en el tratamiento de una afección del crecimiento, relacionada con el peso o metabólica.

La invención también proporciona un método para mejorar la semivida biológica y conservar una actividad biológica de un péptido de interés, que comprende la etapa de unir un primer péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica con el extremo amino terminal de dicho péptido de interés y un segundo y tercer péptidos carboxilo terminales de gonadotropina coriónica con el extremo carboxilo terminal de dicho péptido de interés, mejorando de este modo la semivida biológica de dicho péptido de interés, en el que el CTP es de la subunidad beta de gonadotropina coriónica humana y comprende la secuencia de aminoácidos SSSSKAPPPS, en el que dicho péptido de interés es un péptido de la hormona del crecimiento, en el que dicho péptido de la hormona del crecimiento muestra actividad hGH y es al menos 50 % homólogo de la secuencia expuesta en SEC ID Nº : 47. En este método, la secuencia de al menos un péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica puede comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de las secuencias expuestas en SEC ID Nº : 17-18.

La invención proporciona además un método para producir un polipéptido de la hormona del crecimiento en una célula aislada, que comprende la etapa de transfectar dicha célula con un vector de expresión que comprende una parte codificante que codifica un polipéptido, consistiendo dicho polipéptido en un polipéptido de hGH, dos péptidos carboxilo terminales de gonadotropina coriónica unidos con el extremo carboxilo terminal de dicho polipéptido de hGH, y un péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica unido con el extremo amino terminal de dicho polipéptido de hGH, en el que el péptido carboxilo terminal de gonadotropina es de la subunidad beta de la gonadotropina coriónica humana y comprende la secuencia de aminoácidos SSSSKAPPPS, en el que dicho péptido de la hormona del crecimiento muestra actividad de hGH y es al menos 50 % homólogo de la secuencia expuesta en SEC ID Nº : 47, produciendo de este modo un polipéptido de hGH en una célula aislada. En este método, el polipéptido puede comprender un péptido señal, por ejemplo que comprende una secuencia como se expone en SEC ID Nº : 19. En este método, el vector de expresión puede comprender una secuencia seleccionada de SEC ID Nº : 44, SEC ID Nº : 45 y SEC ID Nº : 46.

Breve descripción de los dibujos Las FIGURAS 1A-1F son diagramas que ilustran seis construcciones de EPO-CTP.

La Figura 1A es un diagrama del polipéptido de SEC ID Nº : 1

La Figura 1B es un diagrama del polipéptido de SEC ID Nº : 2

La Figura 1C es un diagrama del polipéptido de SEC ID Nº : 3

La Figura 1D... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido que comprende un péptido de interés, en el que un primer péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica está unido con el extremo amino terminal de dicho péptido de interés, y un segundo y tercer péptidos carboxilo terminales de gonadotropina coriónica están unidos con el extremo carboxilo terminal de dicho péptido de interés, en el que el péptido carboxilo terminal de gonadotropina es de la subunidad beta de la gonadotropina coriónica humana y comprende la secuencia de aminoácidos SSSSKAPPPS, en el que dicho péptido de interés es un péptido de la hormona del crecimiento, y en el que dicho péptido de la hormona del crecimiento muestra actividad hGH y es al menos 50 % homólogo de la secuencia expuesta en SEC ID Nº : 47.

2. El polipéptido de la reivindicación 1, en el que dicho péptido de interés está glucosilado.

3. El polipéptido de la reivindicación 1, en el que dicho péptido de interés no está glucosilado.

4. El polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que al menos un péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica está glucosilado.

5. El polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que la secuencia de dicho péptido de la hormona del crecimiento comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de las secuencias expuestas en SEC ID Nº .

3. 41.

6. El polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que la secuencia de al menos un péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de las secuencias expuestas en SEC ID Nº : 17 y SEC ID Nº : 18.

7. El polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que al menos un péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica está truncado, y en el que dicho péptido carboxilo terminal truncado comprende al menos un sitio de glucosilación.

8. El polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que al menos un péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica está glucosilado.

9. El polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, que comprende además un péptido señal.

10. El polipéptido de la reivindicación 9, en el que dicho péptido señal comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEC ID Nº : 19.

11. El polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en el que al menos un péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica está unido con dicho polipéptido de hGH mediante un enlazador.

12. El polipéptido de la reivindicación 11, en el que dicho enlazador es un enlace peptídico.

13. Una composición farmacéutica que comprende el polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12.

14. El polinucleótido que codifica el polipéptido de la reivindicación 1.

15. El polinucleótido de la reivindicación 14, en el que la secuencia de dicho polinucleótido comprende una secuencia seleccionada de las secuencias expuestas en SEC ID Nº .

4. 46.

16. El polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 14-15, en el que dicho polipéptido comprende además un péptido señal.

17. El polinucleótido de la reivindicación 16, en el que la secuencia de dicho péptido señal es como se expone en SEC ID Nº : 19.

18. Un vector de expresión que comprende el polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 14-17.

19. Una célula que comprende el vector de expresión de la reivindicación 18.

20. Una composición farmacéutica que comprende el polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 14-17, el vector de expresión de la reivindicación 18, la célula de la reivindicación 19, o su combinación.

21. El uso de un polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12 o un polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 14-17 para la preparación de un medicamento para tratar una afección del crecimiento, relacionada con el peso o metabólica.

22. El uso de la reivindicación 21, en el que la secuencia de al menos un péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de las secuencias expuestas en SEC ID Nº : 17-18.

23. Un método para mejorar la semivida biológica y conservar una actividad biológica de un péptido de interés, que comprende la etapa de unir un primer péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica con el extremo amino terminal de dicho péptido de interés y un segundo y tercer péptidos carboxilo terminales de gonadotropina coriónica con el extremo carboxilo terminal de dicho péptido de interés, mejorando de este modo la semivida biológica de dicho péptido de interés, en el que el péptido carboxilo terminal de gonadotropina es de la subunidad beta de la gonadotropina coriónica humana y comprende la secuencia de aminoácidos SSSSKAPPPS, en el que dicho péptido de interés es un péptido de la hormona del crecimiento, y en el que dicho péptido de la hormona del crecimiento muestra actividad hGH y es al menos 50 % homólogo de la secuencia expuesta en SEC ID Nº : 47.

24. El método de la reivindicación 23, en el que la secuencia de al menos un péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de las secuencias expuestas en SEC ID Nº : 17-18.

25. Un método para producir un polipéptido de la hormona del crecimiento en una célula aislada, que comprende la etapa de transfectar dicha célula con un vector de expresión que comprende una parte codificante que codifica un polipéptido, consistiendo dicho polipéptido en un polipéptido de hGH, dos péptidos carboxilo terminales de 15 gonadotropina coriónica unidos con el extremo carboxilo terminal de dicho polipéptido de hGH, y un péptido carboxilo terminal de gonadotropina coriónica unido con el extremo amino terminal de dicho polipéptido de hGH, en el que el péptido carboxilo terminal de gonadotropina es de la subunidad beta de la gonadotropina coriónica humana y comprende la secuencia de aminoácidos SSSSKAPPPS, y en el que dicho péptido de la hormona del crecimiento muestra actividad hGH y es al menos 50 % homólogo de la secuencia expuesta en SEC ID Nº : 47, produciendo de este modo un polipéptido de hGH en una célula aislada.

26. El método de la reivindicación 25, en el que dicho polipéptido comprende además un péptido señal.

27. El método de la reivindicación 26, en el que la secuencia de dicho péptido señal es como se expone en SEC ID Nº : 19.

28. El método de la reivindicación 25, en el que dicha parte codificante se selecciona del grupo que consiste en SEC 25 ID Nº : 44, SEC ID Nº : 45 y SEC ID Nº : 46.

29. Un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-12 o un polinucleótido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14-17 para uso en el tratamiento de una afección del crecimiento, relacionada con el peso o metabólica.