Método de diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer.

Un método ex vivo para facilitar el diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer en un paciente,

que comprende: (i) determinar el nivel de expresión combinado de al menos cuatro proteínas plaquetarias en una muestra de plaquetas del paciente, seleccionadas de entre la monoamino oxidasa B, el factor XIIIa de coagulación, la tropomiosina total (α y β), la proteína 1 con repeticiones WD, y la apolipoproteína E4 (ApoE4); y (ii) comparar el valor resultante de la operación (i) con un valor testigo,

en donde un resultado mayor que el valor testigo es indicativo de enfermedad de Alzheimer,

caracterizado por que la operación (i) comprende además determinar el nivel de expresión de la glutatión Stransferasa omega-1 (GSTO-1) mutante o de tipo silvestre,

en donde si el paciente tiene uno o dos alelos ApoE4 se determina entonces el nivel de expresión de la GSTO-1 mutante,

y si el paciente no tiene alelos ApoE4 se determina entonces el nivel de expresión de la GSTO-1 de tipo silvestre.

Método de diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer Campo de la invención

Esta invención se refiere a un método diagnóstico ex vivo en que se utiliza la cuantificación de biomarcadores periféricos de la enfermedad de Alzheimer.

Antecedentes de la invención

La enfermedad de Alzheimer es un trastorno neurodegenerativo que afecta a aproximadamente 24 millones de personas en todo el mundo. La enfermedad se caracteriza por una disfunción cognltlva y del comportamiento que resulta de una pérdida de neuronas y sinapsls en la corteza cerebral y ciertas reglones subcorticales del cerebro.

La enfermedad puede empezar muchos años antes de que sea finalmente diagnosticada. En las primeras fases, la pérdida de la memoria a corto plazo es el síntoma más común. Más adelante, los síntomas incluyen desorientación, Ira, cambios del estado de ánimo, alteración del lenguaje, pérdida de la memoria a largo plazo, y el deterioro general de los sentidos y las funciones corporales.

La enfermedad de Alzheimer es el tipo más común de demencia en las personas mayores y afecta a casi la mitad de todos los pacientes con demencia. En consecuencia, el envejecimiento es el principal factor de riesgo para la enfermedad. Entre las personas con 65 años de edad, el 2-3% muestra signos de la enfermedad, mientras que el 25-5% de las personas con 85 años de edad presenta síntomas de enfermedad de Alzheimer y un número aún mayor presenta algunos de los rasgos patológicos de la enfermedad sin los síntomas característicos. La Organización Mundial de la Salud estima que, globalmente, los años de vida potencialmente perdidos por discapacidad (DALY; del inglés, disability adjusted Ufe years) totales excedieron de 11 millones en 25 para la enfermedad de Alzheimer y otras demencias, con un previsto aumento anual del 3,4%. En la actualidad no hay una cura conocida para la enfermedad de Alzheimer, y los tratamientos disponibles ofrecen beneficios sintomáticos relativamente pequeños y son de naturaleza paliativa.

La depresión es un síntoma precoz común en la enfermedad de Alzheimer y se cree que se atribuye, entre otros factores, a una suprarregulaclón de la enzima monoamino oxidasa (MAO). Hay dos isoformas de esta enzima, MAO- A y MAO-B. Ambas se encuentran por todas las células del sistema nervioso central (CNS; del inglés, central riervous system), donde actúan para inactivar neurotransmisores monoaminérgicos que incluyen la fenetilamina y la dopamlna. La MAO-B es también abundante en plaquetas sanguíneas.

El Inicio y la progresión de la enfermedad de Alzheimer se asocian con el desarrollo de placas de amiloide y ovillos neuroflbrilares. Las placas de amiloide (también conocidas como "placas seniles") comprenden densos depósitos ¡nsolubles de beta-amiloide, una proteína derivada de la proteína precursora amiloidea (APP; del inglés, amyloid precursor protein), una proteína transmembranal.

Después de la proteólisis de la APP, las proteínas beta-amiloideas se agregan extracelularmente formando placas. Los ovillos neurofibrilares se forman a causa de la hiperfosforilación de tau, una proteína asociada a los microtúbulos que es abundante en el CNS. Múltiples moléculas de tau hiperfosforiladas llegan a enredarse y formar masas en el interior de los cuerpos celulares nerviosos. Dichos ovillos neurofibrilares causan que los microtúbulos se desintegren, lo que da lugar al colapso del sistema de transporte neuronal.

Normalmente, la enfermedad de Alzheimer se diagnostica clínicamente a partir de la historia del paciente, las observaciones de parientes y las observaciones clínicas. Sin embargo, la presencia de rasgos neurológicos y neuropsicológicos característicos de la enfermedad de Alzheimer, tales como las placas de amiloide y los ovillos neurofibrilares, sólo puede ser frecuentemente determinada post mórtem.

La mayoría de los casos de enfermedad de Alzheimer no presentan herencia familiar; sin embargo, en al menos el 8% de los casos esporádicos de Alzheimer están implicados factores de riesgo genéticos. La herencia del alelo e4 del gen de la apolipoproteína E (ApoE) se considera un factor de riesgo para el desarrollo en hasta el 5% de los casos esporádicos de Alzheimer de inicio tardío.

La glutatión S-transferasa omega-1 (GSTO-1) es un miembro de la familia de enzimas de tipo glutatión S-transferasa que catalizan la conjugación de glutatión reducido (GSH) con diversos sustratos hidrófobos que contienen centros electrófilos. Se sabe que el gen que codifica GSTO-1 existe en diferentes ¡soformas genéticas. Estas isoformas se correlacionan con la edad de inicio (AAO; del inglés, age-at-onset) de la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson [Y. Li et al., Hum. Mol. Genet. (23) 12 (24): 3259-67], Li y sus colaboradores describieron que la GSTO-1 h SNP 7-1 (rs4825, nucleótido A) está asociada con un retraso en la AAO de 6,8 años (+/- 4,41) para la enfermedad de Alzheimer y de 8,6 años (+/- 5,71) para la enfermedad de Parkinson [Y. Li et al., Neurobiol. Aging

(26)27 (8): 187-93],

Babeluk et al. (Clinical Chemistry, página A223, volumen 55, n° 6, Suplemento, 29) comunicaron que pacientes con enfermedad de Alzhelmer que carecían del alelo ApoE4 mostraban una prevalencla significativa del alelo GSTO- 1 de tipo silvestre en comparación con los portadores de ApoE4.

Los marcadores diagnósticos para trastornos neurológlcos son especialmente Importantes en el diagnóstico al principio del curso de la enfermedad, cuando los compuestos terapéuticos presentan el máximo efecto posible. Sin embargo, es difícil un diagnóstico preciso. Se dispone de pocos marcadores diagnósticos para trastornos neuronales en fase precoz, y aquellos que están disponibles se basan en el análisis de un material de muestra (por ejemplo, fluido cerebroespinal) cuya obtención es difícil y dolorosa.

En el Documento W26/13439 se describe un método para diagnosticar la enfermedad de Alzhelmer (AD; del inglés, Alzheimer's dlsease) y/o la enfermedad de Parklnson (PD; del Inglés, Parkinson's disease), que comprende medir el nivel de expresión de uno o más marcadores de AD o marcadores de PD especificados en una muestra de plaquetas aislada de una persona de la que se sospecha que tiene AD o PD y determinar si los niveles de expresión están alterados en comparación con los de un testigo.

Por lo tanto, existe la necesidad de identificar nuevos métodos diagnósticos en que se utilicen biomarcadores de la enfermedad de Alzhelmer que sean periféricamente asequibles de muestras fácilmente obtenibles de un paciente, lo que facilitaría un diagnóstico sencillo y preciso.

Sumario de la invención

Un primer aspecto de la presente invención proporciona un método ex vivo para facilitar el diagnóstico de la enfermedad de Alzhelmer en un paciente, que comprende:

(i) determinar el nivel de expresión combinado de al menos cuatro proteínas plaquetarlas en una muestra de plaquetas del paciente, seleccionadas de entre la monoamlno oxldasa B, el factor XIlia de coagulación, la tropomiosina total (a y (3), la proteína 1 con repeticiones WD, y la apollpoproteína E4 (ApoE4); y

(¡i) comparar el valor resultante de la operación (i) con un valor testigo,

en donde un resultado mayor que el valor testigo es indicativo de enfermedad de Alzheimer, caracterizado por que la operación (i) comprende además determinar el nivel de expresión de la glutatión S-transferasa omega-1 (GSTO-1) muíante o de tipo silvestre, en donde si el paciente tiene uno o dos alelos ApoE4 se determina entonces el nivel de expresión de la GSTO-1 mutante y si el paciente no tiene alelos ApoE4 se determina entonces el nivel de expresión de la GSTO-1 de tipo silvestre.

Descripción de los dibujos

En la Figura 1 se ¡lustra el proceso de decisión para el uso de los respectivos algoritmos de los Modelos 1, 2, 3 y 4.

En las Figuras 2a y 2b se muestran la curva ROC y el gráfico de dispersión, respectivamente, del conjunto de descubrimiento al usar el Modelo 1. En las Figuras 2c y 2d se muestran la curva ROC y el gráfico de dispersión, respectivamente, del conjunto de validación al utilizar el Modelo 1.

En las Figuras 3a y 3b se muestran la curva ROC y el gráfico de dispersión, respectivamente, del conjunto de descubrimiento al usar el Modelo 2. En las Figuras 3c y 3d se muestran la curva ROC y el gráfico de dispersión, respectivamente, del conjunto de validación al utilizar el Modelo 2.

En las Figuras 4a y 4b se muestran la curva ROC y el gráfico de dispersión, respectivamente, del conjunto de descubrimiento al usar el Modelo 3. En las Figuras 4c y 4d se muestran la curva ROC y el gráfico de dispersión, respectivamente, del conjunto... [Seguir leyendo]

1 Un método ex vivo para facilitar el diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer en un paciente, que comprende:

(i) determinar el nivel de expresión combinado de al menos cuatro proteínas plaquetarias en una muestra de plaquetas del paciente, seleccionadas de entre la monoamino oxidasa B, el factor Xllla de coagulación, la

tropomiosina total (a y P), la proteína 1 con repeticiones WD, y la apolipoproteína E4 (ApoE4); y

(ii) comparar el valor resultante de la operación (i) con un valor testigo,

en donde un resultado mayor que el valor testigo es indicativo de enfermedad de Alzheimer,

caracterizado por que la operación (i) comprende además determinar el nivel de expresión de la glutatión S- transferasa omega-1 (GSTO-1) muíante o de tipo silvestre,

en donde si el paciente tiene uno o dos alelos ApoE4 se determina entonces el nivel de expresión de la GSTO-1 muíante,

y si el paciente no tiene alelos ApoE4 se determina entonces el nivel de expresión de la GSTO-1 de tipo silvestre.

2. Un método según la Reivindicación 1, en donde la variación biológica en la expresión de las proteínas plaquetarias se normaliza por referencia a la expresión de una o más proteínas identificadas en la Tabla 3 o la Tabla

4.

3. Un método según la Reivindicación 2, en donde la proteína empleada para normalizar la variación biológica es la proteína 14-3-3 gamma.