Composiciones que comprenden el adyuvante QS-21 y polisorbato o ciclodextrina como excipiente.

Una composición que comprende (a) QS-21 y (b) polisorbato 80, en donde la composición es una disolución

Composiciones que comprenden el adyuvante QS-21 y polisorbato o ciclodextrina como excipiente CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere al campo de los adyuvantes inmunológicos y al uso de los mismos como adyuvantes inmunológicos en vacunas. Las composiciones de la presente invención exhiben propiedades significativamente mejoradas, relevantes para el efecto lítico, la tolerancia al dolor asociado con QS-21 y la estabilidad del producto de QS- 21, y mantienen una actividad adyuvante completa.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Saponinas adyuvantes han sido identificadas y purificadas a partir de un extracto acuoso de la corteza del árbol de América del Sur, Quillaja saponaria Molina. Entre los 22 picos que eran separables y mostraban actividad saponina, QS-21 era una de las saponinas purificadas más predominantes. Esta saponina ha sido purificada sustancialmente mediante cromatografía líquida de alta presión (HPLC), cromatografía en sílice líquida de baja presión y cromatografía interactiva hidrófila (HILIC). Se ha encontrado que QS-21 es útil como un adyuvante inmunológico para potenciar respuestas inmunológicas en individuos a una concentración mucho más baja que las preparaciones de saponina heterogéneas previamente disponibles, sin los efectos tóxicos asociados con preparaciones de saponina bruta.

QS-21 es una saponina glucósido de triterpeno lítica de la membrana. Forma micelas de aproximadamente el mismo radio que la albúmina de suero bovina (Kensil, patente de EE.UU. N° 5.057.540) y tiene una concentración micelar crítica de aproximadamente 50 pg / mi en PBS (Soltysik, S., et al., 1995, Vaccine 13: 1403-1410).

La potencia de una formulación adyuvante que contiene un antígeno más QS-21 puede evaluarse en experimentos que abordan la relación de la dosis de adyuvante a la función inmunológica (experimentos de dosis-respuesta). Se espera que una disminución en la potencia adyuvante aumente la dosis mínima (dosis umbral) requerida para la potenciación de la respuesta inmune. Se espera que una composición deseable mantenga una potencia equivalente o mejor que la formulación que se utiliza como una referencia. Para QS-21, la formulación de referencia es una solución simple en solución salina tamponada con fosfato (PBS) o solución salina.

La actividad adyuvante de QS-21 se evalúa en modelos de animales tales como ratones. Las respuestas primarias medidas son aumentos en anticuerpos específicos de antígenos y linfocitos T citotóxicos (CTL - siglas en inglés) específicos de antígenos. La dosis umbral de QS-21 que potenciará la respuesta inmune murina (anticuerpo o CTL) ha sido medida en solución tampón simple tal como PBS. Una dosis de 2,5 pg ha demostrado ser la dosis umbral para los anticuerpos (Kensil, C.R., et al, 1993, Vaccine Research 2:. 273-281) y para CTL (Newman, M.J., et al, 1992, J. Immunoloav 148: 2357-2362) para el antígeno ovoalbúmina (OVA) en ratones C57BL/6 en PBS. Se observaron dosis umbrales similares cuando se incluía hidróxido de aluminio en la formulación de PBS (Kensil, C.R., et al, 1993, Vaccine Research 2:. 273-281). Sin embargo, se espera que pueda haber diferencias en la potencia entre las diferentes composiciones de un adyuvante dado.

A pesar de estas cualidades beneficiosas, QS-21 posee también algunas cualidades no deseadas. Por ejemplo, QS-21 se asocia con bicapas de fosfolípidos y provoca un efecto lítico sobre determinadas membranas celulares (es decir, eritrocitos). QS-21 se absorberá a la bicapa fosfolipídica de eritrocitos de oveja y determinará que los glóbulos rojos liberen la hemoglobina. Esta liberación de hemoglobina, que es conocida como hemolisis, se produce a una concentración de aproximadamente 5-7 pg/ml en un tampón simple tal como solución salina o PBS (Kensil, C.R., et al, 1991, J. Immunoloav 146: 431-437). A concentraciones más altas (por encima de la concentración micelar crítica de QS-21), se produce la lisis total de la membrana de glóbulos rojos. El efecto lítico de QS-21 es, por lo tanto, una propiedad indeseable para una composición.

En estudios in vivo, no se observa hemolisis. Sin embargo, después de la inyección intramuscular de QS-21/soluciones salinas en conejos New Zealand blancos, se observa en algunos animales una lesión de leve a moderada de fibroblastos o necrosis cuando el sitio de inyección se analiza histopatológicamente (Kensil, C.R., et al, 1995, En: Vaccine Pesian: The Subunit and Adiuvant Approach. Powell, M.F. y Newman, M.J., Comps., Plenum Press, NY). Además, la creatina quinasa, un marcador de la lesión muscular, se incrementa después de la inyección con QS-21 en solución salina o PBS. Se piensa que este aumento es debido al efecto lítico de QS-21 en las membranas celulares.

Además de ello, en ensayos clínicos, algunos individuos han experimentado un dolor inmediato transitorio después de la inyección con QS-21 en soluciones tampón simple (solución salina o PBS). Este dolor, descrito por la mayoría de los individuos como un dolor ardiente, puede ser una reacción secundaria correlacionada con el efecto lítico del adyuvante QS-21. El dolor del paciente es igualmente una propiedad desagradable para una composición.

La estabilidad del producto es otra preocupación para composiciones que contienen QS-21. La vida útil de un producto de vacuna se define típicamente por la extensión de tiempo para alcanzar un bajo nivel definido y aceptable de degradación (tal como el tiempo para una degradación de 10%, también conocido como t9o). La mayoría de los productos de vacunas comerciales tienen una vida útil de por lo menos 18 a 24 meses si se almacena en un refrigerado a 4°C. Adyuvantes, que son componentes esenciales de vacunas, por lo tanto, también deben tener vidas útiles igualmente largas. Sin embargo, la vida útil de 50 pg/ml de solución de QS-21 a pH 7,0 a 4°C se alcanza en aproximadamente 3 meses. La razón de la corta vida útil es porque el enlace éster de QS-21 es cada vez más lábil a pH creciente y porque los monómeros de QS-21, en oposición a las micelas, son sometidos a hidrólisis. La necesidad de estabilizar composiciones de adyuvante QS-21 es significativa.

El documento EP 0187286 A1 se refiere a vacunas constituidas por un antígeno, una saponina y un aceite. De Souza et al., Infectlon and Immunlty, 64: 3532-3536 (1996) se refiere a citoqulnas y a una subclase de anticuerpos asociada con una Inmunidad protectora frente a la malaria en la fase de sangre en ratones vacunados con el extremo C de la proteína 1 de la superficie de merozoltos fusionada a glutatión-S-transferasa, combinada con una formulación de adyuvante que contiene escualano, Tween 80 y pluronic L121. Ten Hagen et al., J. Immunol. 151: 7077-7085 (1993) se refiere al papel de los adyuvantes en la modulación del isotipo de anticuerpos, especificidad e inducción de la protección mediante vacunas de Plasmodium yoelii en fase de sangre entera. Los ratones fueron inmunizados con parásitos de Plasmodium yoelii en fase de sangre entera exterminados en 15 formulaciones de adyuvantes, y luego fueron estimulados y se les enfrentó a sangre parasitada. Reybrouck, Zentralbl. Bakteriol. B. 168: 480-492 (1979) discute la eficacia de inactivadores frente a 14 sustancias desinfectantes. Se sometió a ensayo a más de 24 inactivadores en cuanto a su idoneidad frente a 14 sustancias desinfectantes mediante un ensayo en suspensión cuantitativo.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

Existe una necesidad de composiciones del adyuvante de saponina QS-21 que puedan ser utilizadas para estimular la respuesta inmune antigénica en una dosis relativamente baja con bajas reacciones locales y efectos secundarios, pero también cuenta con un reducido efecto lítico, una tolerancia mejorada a QS-21 y una estabilidad incrementada. Por consiguiente, la presente invención proporciona nuevas composiciones de QS-21 que tienen estas características mejoradas en comparación con una solución sencilla de QS-21 en un tampón tal como solución salina o PBS. Sorprendentemente, la potencia adyuvante completa de QS-21 en las composiciones descritas no está comprometida en comparación con una formulación control de QS-21 en PBS.

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

La Figura 1 representa una gráfica que muestra la potencia adyuvante de diversas composiciones. La Figura 1A muestra el efecto de pollsorbato 40, polisorbato 60 y pollsorbato 80 sobre la respuesta Inmune de ratones Balb/c a la ovoalbúmlna a diferentes concentraciones de QS-21. La Figura 1B muestra el efecto de metll-|3-c¡clodextrina sobre la respuesta Inmune de ratones Balb/c a la ovoalbúmlna a diferentes concentraciones de QS-21.

La Figura 2 representa una gráfica que muestra el efecto de polisorbato 80 e h¡droxiprop¡l-P-c¡clodextr¡na... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende (a) QS-21 y (b) polisorbato 80, en donde la composición es una disolución.

2. La composición de la reivindicación 1, en donde el polisorbato 80 se encuentra a una concentración en un intervalo de 250 pg/ml a 2 mg/ml en la disolución.

3. La composición de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, que comprende, además, un antígeno o ácido nucleico que codifica un péptido o proteína antigénico.

4. La composición de acuerdo con la reivindicación 3, que comprende dicho antígeno.

5. La composición de acuerdo con la reivindicación 3 ó 4, para uso como un medicamento.

6. La composición de acuerdo con la reivindicación 3 ó 4, para uso para aumentar o potenciar una respuesta inmune en un sujeto.

7. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el sujeto es un ser humano.

8. Uso de la composición de acuerdo con la reivindicación 3 ó 4 para la fabricación de un medicamento para uso para aumentar o potenciar una respuesta inmune en un sujeto.

9. El uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el sujeto es un ser humano.

10. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 4 y la composición para uso de acuerdo con las reivindicaciones 5 a 7, en donde el antígeno es un péptido, una proteína, un polisacárido o un lípido.

11. La composición o uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde la disolución comprende solución salina o solución salina tamponada con fosfato.

12. La composición para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7 ó 10 a 11, en donde la composición es para la administración por vía parenteral, intravenosa, intramuscular, subcutánea, ¡ntranasal u oral.

13. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a4ó10a12yla composición para uso de

acuerdo con las reivindicaciones 5 - 7 ó 10 a 12, en donde la composición reduce el efecto lítico in vitro de la QS-21, en

comparación con una disolución simple de QS-21 en un tampón tal como solución salina o PBS.

14. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 10 a 13 y la composición para uso de

acuerdo con las reivindicaciones 5 - 7 ó 10 a 13, en donde la composición mejora la estabilidad de la QS-21, en

comparación con una disolución simple de QS-21 en un tampón tal como solución salina o PBS.

15. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3a4ó10a14yla composición para uso de acuerdo con las reivindicaciones 5 - 7 ó 10 a 14, en donde la composición mantiene la potencia de adyuvante máxima de la QS-21, en comparación con una formulación control de QS-21 en PBS.

16. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 10 a 15 y la composición para uso de acuerdo con las reivindicaciones 5 - 7 ó 10 a 15, en donde la composición mejora la tolerancia al dolor de un sujeto a la QS-21, en comparación con una disolución simple de QS-21 en un tampón tal como solución salina o PBS.

17. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3a4ó10a12yla composición para uso de acuerdo con las reivindicaciones 5 - 7 ó 10 a 12, en donde la composición tiene las características mejoradas de un efecto lítico reducido, una tolerancia mejorada a QS-21 y una estabilidad incrementada, en comparación con una disolución simple de QS-21 en un tampón tal como solución salina o PBS.

18. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 10 a 17y la composición para uso de acuerdo con las reivindicaciones 5-7ó10a17, en donde la QS-21 en la disolución se encuentra a una concentración de 100 pg/ml en la disolución.

19. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 10 a 17 y la composición para uso de acuerdo con las reivindicaciones 5-7ó10a17, en donde la composición es una formulación de vacuna, y en donde la QS-21 se encuentra a una concentración de 50 a 200 Mg/ml.