Formulaciones que comprenden nucleótidos antisentido para conexinas.

1.Una formulación para uso en el tratamiento de un ser humano mediante una terapia,

cuya formulación comprende un polinucleótido antisentido de conexina 43; junto con un soporte o un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Formulaciones que comprenden nucleótidos antisentido para conexinas Esta invención se refiere a las formulaciones para usar en tratamientos terapéuticos, particularmente aquellos en los que una interrupción localizada en la comunicación directa célula-célula es deseable.

Antecedentes Las uniones intercelulares son estructuras de membrana celular que facilitan la comunicación directa célula-célula. Un canal de unión intercelular está formado por dos hemicanales (conexones) , cada uno está compuesto por seis subunidades de conexinas. Estas conexinas son una familia de proteínas, comúnmente denominadas según sus pesos moleculares o clasificadas según una base filogenética, es decir, en una clase α y una clase β.

Una capacidad para controlar la expresión de las conexinas (y en particular para disminuir sus niveles) proporcionaría por lo tanto una oportunidad para modular la comunicación célula-célula en un paciente, para propósitos terapéuticos y/o de remedio. Sin embargo, ya que un número de proteínas conexinas se expresa ampliamente a través del cuerpo, no se desea un efecto de disminución general de los niveles para inducir un efecto terapéutico en un sitio específico.

Los oligonucleótidos antisentidos (ODNs) tienen un potencial considerable como agentes para la manipulación de la expresión génica específica (revisado: Stein y otros, 1992; Wagner 1994) . Sin embargo, quedan dificultades que necesitar ser superadas. Estas incluyen la vida media corta de tales ODNs (oligómeros fosfodiéster sin modificar tienen típicamente una vida media intracelular de sólo 20 minutos debido a la degradación por nucleasas intracelulares (Wagner 1994) ) y su liberación de modo consistente y fiable a los tejidos diana.

Fue con la intención de superar al menos parcialmente estas dificultades que los solicitantes concibieron la presente invención.

Compendio de la invención Consecuentemente, en un primer aspecto, la invención proporciona una formulación para uso en el tratamiento del cuerpo humano mediante una terapia, cuya formulación comprende: un polinucleótido antisentido de conexina 43 junto con un soporte o un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En una forma preferida, la formulación contiene polinucleótidos sólo para una proteína conexina. Muchos aspectos de la invención se describen con referencia a los oligodesoxinucleótidos. Sin embargo, se

comprende que otros polinucleótidos adecuados (tales como polinucleótidos ARN) pueden ser usados en estos aspectos. Alternativamente, la formulación contiene oligodesoxinucleótidos para más de una proteína conexina, siempre que

una de las proteínas conexinas a la que se dirigen los oligodesoxinucleótidos sea conexina 43. Otras proteínas conexinas a las que los oligodesoxinucleótidos están dirigidos incluyen conexina 26, conexina 31.1 y conexina 32. Convenientemente se selecciona el oligodesoxinucleótido para conexina 43 de:

GTA ATT GCG GCA AGA AGA ATT GTT TCT GTC;

GTA ATT GCG GCA GGA GGA ATT GTT TCT GTC; y

GGC AAG AGA CAC CAA AGA CAC TAC CAG CAT,

o tiene al menos 70%, 80%, 90%, 95%, 97% ó 99% de homología con un polinucleótido seleccionado de: GTA ATT GCG GCA AGA AGA ATT GTT TCT GTC; y GTA ATT GCG GCA GGA GGA ATT GTT TCT GTC.

Lo más convenientemente el oligodesoxinucleótido para la conexina 43 es: GTA ATT GCG GCA AGA AGA ATT GTT TCT GTC Convenientemente el oligodesoxinucleótido para la conexina 26 y es: TCC TGA GCA ATA CCT AAC GAA CAA ATA Convenientemente el oligodesoxinucleótido para la conexina 31.1 es: CGT CCG AGC CCA GAA AGA TGA GGT C

Convenientemente el oligodesoxinucleótido para la conexina 32 es:

TTT CTT TTC TAT GTG CTG TTG GTG A.

El polinucleótido en la formulación puede ser: (i) ADN o ARN; (ii) un oligodesoxinucleótido; (iii) un oligonucleótido con fosfodiéster no modificado; (iv) un oligonucleótido con fosfodiéster químicamente modificado; (v) un oligonucleótido químicamente modificado seleccionado de fosforotioatos, metilfosfonatos, fosforamidatos, fosforoditioatos, N3'P5'-fosforoamidatos, oligoribonucleótido fosforotioatos y sus análogos 2'-O-alquilo, 2'-Ometilribonucleótido metilfosfonatos y oligonucleótidos con núcleo mixto; (vi) entre 6 y 40 nucleótidos de longitud, tal como entre 12 y 20 nucleótidos de longitud; (vii) monocatenario; o (viii) bicatenario.

En una realización, el polinucleótido es un oligómero fosfodiéster no modificado de 30 nucleótidos de longitud.

Los polinucleótidos antisentido se pueden formular para administración parenteral, intramuscular, intracerebral, intravenosa, subcutánea o transdérmica. Los polinucleótidos antisentido se administran preferentemente de forma tópica (en la parte a ser tratada) . Adecuadamente, los polinucleótidos antisentido se combinan con un excipiente, vehículo o diluyente farmaceúticamente aceptables para proporcionar una composición farmacéutica.

Excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen cualquiera de los comúnmente usados para administración tópica. La formulación tópica puede estar en forma de crema, ungüento, gel, emulsión, loción o pintura. La formulación de la invención se puede presentar también en forma de un apósito impregnado.

Materiales excipiente adecuados incluyen cualquier excipiente o vehículo comúnmente usado como base para cremas, lociones, geles, emulsiones, lociones o pinturas para la administración tópica. Los ejemplos incluyen agentes de emulsificación, excipientes inertes que incluyen bases hidrocarbonadas, bases de emulsificación, disolventes no tóxicos o bases hidrosolubles. Ejemplos particularmente adecuados incluyen lanolina, parafina dura, parafina liquida, parafina amarilla blanda o parafina blanca blanda, cera de abeja blanca, cera de abeja amarilla, cetoestearil alcohol, cetilalcohol, dimeticonas, ceras emulsionantes, isopropil miristato, cera microcristalina, alcohol oleílico y alcohol estearílico.

Preferentemente, el excipiente farmacéuticamente aceptable o vehículo es un gel, un gel copolímero polioxietilenopolioxipropileno no iónico adecuado, por ejemplo, un gel Plurónico, preferentemente Plurónico F-127 (BASF Corp.) . Este gel es particularmente preferido, ya que es líquido a baja temperatura pero rápidamente se fija a temperaturas fisiológicas, que limitan la liberación del componente ODN al sitio de aplicación o inmediatamente adyacente a ese sitio. La formulación puede comprender Pluronic F-127 en forma de gel o líquida.

El excipiente farmacéuticamente aceptable puede seleccionarse de disolución salina isotónica, disolución salina tamponada con fosfato, un agente catiónico o lipofectante.

Un agente auxiliar tal como caseína, gelatina, albúmina, pegamento, alginato sódico, carboximetilcelulosa, metilcelulosa, hidroxietilcelulosa o polivinil alcohol se pueden incluir también en la formulación de la invención.

La composición farmacéutica se puede formular para proporcionar una liberación sostenida del polinucleótido antisentido.

Convenientemente, la formulación incluye además un tensioactivo para ayudar con la penetración oligodesoxinucleotídica a la célula o la formulación puede contener cualquier agente de carga adecuado. Cualquier tensioactivo no tóxico adecuado puede ser incluído, tal como DMSO. Alternativamente, se puede incluir un agente de penetración transdérmica tal como la urea.

En un aspecto más, la invención proporciona un método de reducción, de sitio específico, de los niveles de expresión de la proteína conexina con fines terapéuticos y/o cosméticos, que comprende administrar una formulación como se define anteriormente a un sitio o en un paciente en el se requiere dicha reducción.

Convenientemente, la formulación se administra en una cantidad suficiente para reducir los niveles de expresión de dicha (s) proteína (s) conexina (s) durante al menos 24 horas después de la administración.

El polinucleótido puede administrarse por administración continua durante 24 horas o más.

El polinucleótido puede administrarse a una dosis de 0, 1 a 100 mg/kg de peso corporal ó 1 a 40 mg/kg de peso corporal.

En otro aspecto más, la invención proporciona una formulación para uso en el tratamiento de un ser humano para una herida o para inflamación cuya formulación comprende un polinucleótido antisentido para una conexina 43 junto con un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

Preferentemente, dicha herida es una quemadura.

Alternativamente, dicha herida es el resultado de un trauma físico en el tejido, incluyendo tejidos neuronales como el cerebro, la médula espinal o el... [Seguir leyendo]

1.Una formulación para uso en el tratamiento de un ser humano mediante una terapia, cuya formulación comprende un polinucleótido antisentido de conexina 43; junto con un soporte o un vehículo farmacéuticamente aceptable.

2.Una formulación para uso en el tratamiento de un ser humano para una herida o para inflamación cuya formulación comprende un polinucleótido antisentido de una conexina 43; junto con un soporte o un vehículo farmacéuticamente aceptable.

3.Una formulación para uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, que se formula para administración tópica, tal como en la forma de una crema, ungüento, gel, emulsión, loción o pintura.

4.Una formulación para uso de acuerdo con la reivindicación 3, en donde el soporte o vehículo farmacéuticamente aceptable es un gel

5.Una formulación para uso de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el gel es un copolímero no iónico polioxietileno-polioxipropileno.

6.Una formulación para uso de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el gel es un gel de Pluronic.

7.Una formulación para uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, que comprende Pluronic F-127 en forma de gel o líquida.

8.Una formulación para uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde el polinucleótido se formula para la administración por vía parenteral, intramuscular, intracerebral, subcutánea o transdérmica.

9.Una formulación para uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde el tratamiento es para administrarse 20 por liberación continua durante 24 horas o más.

10.Una formulación para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es una formulación de liberación retardada.

11.Una formulación para uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde la formulación comprende uno o más de caseína, gelatina, albúmina, pegamento, alginato sódico, carboximetilcelulosa, metilcelulosa, hidroxietilcelulosa y 25 alcohol polivinílico.

12.Una formulación para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el polinucleótido es:

(i) ADN o ARN;

(ii) un oligodesoxinucleótido; 30 (iii) un oligonucleótido con fosfodiéster no modificado;

(iv) un oligonucleótido con fosfodiéster químicamente modificado;

(v) un oligonucleótido químicamente modificado seleccionado de fosforotioatos, metilfosfonatos, fosforamidatos, fosforoditioatos, N3'P5'-fosforoamidatos, oligoribonucleótido fosforotioatos y sus análogos 2'O-alquilo.

2. O-metilribonucleótido metilfosfonatos y oligonucleótidos con núcleo mixto;

(vi) entre 6 y 40 nucleótidos de longitud, tal como entre 12 y 20 nucleótidos de longitud;

(vii) monocatenario; o (viii) bicatenario.

13.Una formulación para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 8, 9, 10 y 12, en donde el soporte farmacéuticamente aceptable se selecciona de disolución salina isotónica, disolución salina tamponada con 40 fosfato, un agente catiónico o lipofectante.

14.Una formulación para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el polinucleótido se administra a una dosis de 0, 1 a 100 mg/kg de peso corporal ó 1 a 40 mg/kg de peso corporal.

15.Una formulación para uso de acuerdo con la reivindicación 13 ó 14 en donde el polinucleótido se selecciona entre:

GTA ATT GCG GCA AGA AGA ATT GTT TCT GTC;

GTA ATT GCG GCA GGA GGA ATT GTT TCT GTC; y GGC AAG AGA CAC CAA AGA CAC TAC CAG CAT,

o tiene al menos 70%, 80%, 90%, 95%, 97% ó 99% de homología con un polinucleótido seleccionado entre: GTA ATT GCG GCA AGA AGA ATT GTT TCT GTC; y 5 GTA ATT GCG GCA GGA GGA ATT GTT TCT GTC.

16.Una formulación para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el polinucleótido es un oligómero fosfodiéster no modificado de 30 nucleótidos de longitud. 17.Una formulación para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para uso en un método para estimular la cicatrización de heridas, tratar inflamación o disminuir la formación de cicatrices. 10 18.El uso de una formulación como se define en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la fabricación de un medicamento para estimular la cicatrización de heridas, tratar inflamación o disminuir la formación de cicatrices.