Método de diagnóstico para la receptividad endometrial.

Un método para detectar la receptividad endometrial para la implantación de un embrión en una hembra mamífera,

que comprende las etapas de:

a) determinar el nivel de prostaglandina E2 (PGE2) en una muestra de fluido endometrial obtenida de dicha hembra de mamífero; y

b) identificar dicha hembra de mamífero como receptora a la implantación del embrión cuando el nivel de PGE2 en dicha muestra de fluido endometrial aumenta con relación a una muestra de referencia.

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DESCRIPCIÓN

Método de diagnóstico para la receptividad endometrial Campo de la invención La invención se refiere a un método no invasivo para la detección de la receptividad endometrial para la implantación de un embrión. El método es especialmente aplicable para determinar el estado de fertilidad de una hembra de mamífero, preferiblemente una mujer.

Antecedentes de la invención Se estima que el 12% de las parejas que intentan concebir sufren de infertilidad, y debido al aumento de la edad de gestación esta cifra va en aumento. La fertilización in vitro (IVF â?" siglas en inglés) se ha utilizado cada vez más para ayudar a las parejas no fértiles a quedar embarazadas. Desde el primer tratamiento de la IVF con éxito en 1978, el cual condujo al nacimiento de Louise Brown, muchos de los avances técnicos y médicos han contribuido a mejorar la eficiencia; hoy en día, alrededor del 70% de las mujeres sometidas a tratamiento de IVF tienen resultados exitosos. Aún así, aproximadamente el 50% de las pacientes no quedan embarazada o tienen pérdidas por un embarazo temprano, lo cual exige esfuerzos adicionales entre la comunidad científica para continuar la investigación en este campo.

Generalmente, la IVF es un proceso multi-etapa que implica la recuperación de óvulos maduros de la paciente o de un donante; la incubación de los óvulos en medios de cultivo artificiales; la recogida de esperma del paciente o donante y la subsiguiente preparación; la fecundación del óvulo por el esperma; el seguimiento y la selección de embriones de buena calidad; y la transferencia de éstos a la cavidad uterina. El embrión debe implantarse en el endometrio receptivo para que el embarazo pueda progresar. Está bien establecido que este paso particular es el responsable de un porcentaje importante de los fracasos y, por lo tanto, es clínicamente relevante para estudiar posibles causas y soluciones del problema.

La implantación del embrión transferido implica una diafonía sincronizada entre un endometrio receptivo y un blastocisto funcional [Wang, H., y Dey, SK. 2006. Roadmap to embr y o implantation: clues from mouse models. Nature Review Genetics. 7:185-199]. Este fenómeno sólo puede tener lugar durante la ventana de implantación, un período auto-limitado de receptividad endometrial que se extiende entre los días 19 y 23 del ciclo menstrual (mujeres) . En los ciclos menstruales normales, esto se consigue a través de los efectos locales de los estrógenos y la progesterona en los ovarios, que inducen una serie de eventos celulares y moleculares en el endometrio que conducen a una receptividad del endometrio apropiada.Esta última se evalúa utilizando los criterios de Noyes para datar el endometrio, que fueron propuestos hace más de 50 años [Noyes, RW., Hertig, AJ., y Rock, J. 1950. Dating the endometrial biopsy. Fertil Steril, 1:3-25], pero sigue siendo el método preferido utilizado en la actualidad para medir la receptividad endometrial.Hoy en día, a la luz de 15 años de experiencia con la IVF de óvulos de donante, se acepta que la evaluación histológica añade poca información clínicamente significativa, y debe ser sustituida por el criterio funcional de la receptividad endometrial.

La era de la biología molecular y celular, y el desarrollo de nuevas técnicas analíticas, ha ayudado a la búsqueda de predictores más consistentes de un endometrio receptivo.Tras la inducción con hormonas esteroides, hasta la fecha se ha identificado un gran número de mediadores estructurales y moleculares que producen biomarcadores potenciales de receptividad endometrial, incluida la presencia de pinópodos en la superficie de las células endometriales, moléculas de adhesión tales como integrinas, citoquinas, factores de crecimiento, lípidos y otros [Nikas, G., y Aghajanova.2002. Endometrial pinopodes: some more understanding on human implantation? Reprod Biomed Online 4 Supl. 3:18-23; Lessey, BA. 2003. Two pathways of progesterone action in the human endometrium: implications for implantation and contraception. Steroids. 68:809-815; Robb L, Dimitriadis E, Li R, Salamonsen LA., 2002 Leukemia inhibitor y factor and interleukin-11: cytokines with key roles in implantation. J. Reprod Immunol. 57: 129-141]. A modo ilustrativo, la producción de dos prostaglandinas (PGs) , a saber, prostaglandina E2 (PGE2) y prostaglandina F2 alfa (PGF2α) aumenta en el endometrio humano en la fase luteal media en la que está situada la ventana de implantación [Hoozemans DA et al. Human embr y o implantation: current knowledge and clinical implications in assisted reproductive technology. Reprod Biomed Online 2004, 9 (6) :692-715].

Además de ello, el análisis genético y proteómico han añadido nuevas herramientas interesantes para la evaluación de la receptividad endometrial, y se pueden utilizar muestras de biopsia endometrial para identificar

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moléculas asociadas con la receptividad uterina para obtener una mejor comprensión de la implantación en seres humanos. Estos enfoques, sin embargo, aún no han dado resultados aplicables a la práctica clínica diaria de la IVF, ya que ningún factor específico ha sido identificado como crucial para la implantación en seres humanos [Strowitzki, T., Germeyer, A., Popovici, R., et al. 2006. The human endometrium as a fertility-determining factor. Human Reproduction Update. 12:617-630]. Además, un gran retroceso en la aplicación de técnicas biopsiadependientes se encuentra en su naturaleza invasiva, y también en la necesidad de biopsias endometriales adecuadamente temporizadas que interrumpen el punto final necesario de la implantación [van der Gaast, MH., Beier-Hellwig, K., Fauser, BC., et al. 2003. Endometrial secretion aspiration prior to embr y o transfer does not reduce implantation rates. Reprod Biomed Online. 7:105-109].

El análisis de las secreciones endometriales es una nueva posibilidad, no perjudicial, para la investigación de la receptividad endometrial. Es importante destacar que, la aspiración del fluido endometrial no afecta a las tasas de embarazo [van der Gaast et al., 2003, citado supra]. Este enfoque proporciona lecturas fiables de las proteínas individuales que se correlacionan con días de ciclo y ha demostrado ser eficaz en matrices de proteínas utilizando un sistema Luminex [Boomsma, CM., Kavelaars, A., Eijkemans, MJC., et al. 2009. Cytokine profiling in endometrial secretions: a non invasive window on endometrial receptivity. Reprod Biomed Online. 18:85-94], abriendo así el campo para una aplicación no invasiva.

Aunque se han descrito algunos marcadores bioquímicos mediante la evaluación de la receptividad endometrial [Giudice, L.C. 1999.Hum Reprod 14 Supl 2:3-16; Achache, H et al.; Human Reproduction Update, 2006; 12:731-46, Thomas, K et al.; Fertil. Steril. 2003; 80:502-507; documento WO03062832], existe la necesidad en la técnica de biomarcadores moleculares específicos y fiables para la detección de la receptividad endometrial para la implantación del embrión en mujeres, que pueden ser utilizados en la clínica.

La metabolómica es una disciplina dedicada al estudio sistemático de pequeñas moléculas (es decir, metabolitos) en las células, tejidos y fluidos biológicos. Los metabolitos son los productos finales de los procesos de regulación celular, y sus niveles pueden ser considerados como la respuesta amplificada de los sistemas biológicos a los cambios genéticos o medioambientales. Los médicos han confiado durante décadas en una pequeña parte de la información contenida en el metaboloma, por ejemplo midiendo la glucosa para vigilar la diabetes y medir el colesterol para la salud cardiovascular. Se han desarrollado ya nuevas plataformas de análisis metabolómicas sofisticadas y herramientas informáticas para proporcionar una medición extendida y sensible de la metaboloma.

Se sabe que los lípidos juegan un papel importante como componentes estructurales (p. ej., las membranas celulares) , componentes de almacenamiento de energía y como moléculas de señalización. Los lípidos se definen en líneas generales como moléculas pequeñas hidrófobas o anfipáticas que pueden proceder, por completo o en parte, de una condensación de tioésteres basada en carbaniones y/o de una condensación de unidades de isopreno basada en la carbocación. La "lipidómica" se puede considerar como un sub-campo de la metabolómica que tiene por objeto aclarar los procesos biológicos en el contexto de los lípidos midiendo y caracterizando los perfiles de lípidos extendidos a nivel molecular (perfiles lipidómicos) . Medidas de lípidos clínicas tradicionales cuantifican las cantidades... [Seguir leyendo]

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1. Un método para detectar la receptividad endometrial para la implantación de un embrión en una hembra mamífera, que comprende las etapas de: 5 a) determinar el nivel de prostaglandina E2 (PGE2) en una muestra de fluido endometrial obtenida de dicha hembra de mamífero; y b) identificar dicha hembra de mamífero como receptora a la implantación del embrión cuando el nivel de PGE2 en dicha muestra de fluido endometrial aumenta con relación a una muestra de referencia.

2. Método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que también se determina el nivel de prostaglandina F2 alfa (PGF2ï?¡) en la muestra de fluido endometrial obtenida de dicha hembra de mamífero.

3. Método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que dicha hembra de mamífero es una mujer. 15

4. Método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la muestra de referencia es muestra de fluido endometrial obtenida de dicha hembra durante el periodo no fértil de dicha hembra.

5. Método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la muestra de referencia es

muestra de fluido endometrial obtenida de una población de hembras de mamífero durante el periodo no fértil de dichas hembras.

6. Método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que se mide el nivel tanto de PGE2 como de PGF2ï?¡. 25

7. Método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que los niveles de PGE2 y/o PGF2ï?¡ se determinan mediante cromatografía líquida combinada con espectrometría de masas tándem.