Composición para su uso como agente antifúngico.

Composición para su uso como agente antifúngico.

La presente invención proporciona una composición que comprende quitosano,

o un oligosacárido de quitosano, y fluconazol, la cual es de utilidad para inhibir el crecimiento en células eucariotas. Por tanto, se propone su uso como agente antifúngico y para la prevención y/o tratamiento de infecciones fúngicas.

La presente invención se encuadra en I~I campo de las composiciones antifúngicas, específicamente dentro de las composici-ones que conducen a una mayor sensibilidad de las células eucariotas a los efectos del quitosano o de sus oligosacáridos.

ESTADO DE LA TÉCNICA

La quitina es un polímero natural abllndante que forma el exoesqueleto de los crustáceos, la cutícula de los artrópodos y las paredes celulares de la mayoría de los hongos. El quitosano es un polímero de N-glucosamina obtenido por N-deacetilación parcial de la quitina. La hidrólisis ácida o la rotura enzimálica de los enlaces glicosídicos de las cadenas de quilosanc) , genera cadenas más cortas de un tamaño <1-10 KDa de oHgosacáridos de quitosano (CaS) . cas tienen mayores propiedades antimicrobianas que el quitc) sano y actúan como aquél desestabilizando/permeabilizando las metmbranas celulares de bacterias, levaduras y de otros hongos.

El quitosano ejerce una acción antifúngic:a en diversos hongos (Palma~Guerrero J., et al., 2010, Appl Microbiol Biol. , 87:222'7-2245) . Dicho compuesto inhibe tanto el crecimiento de las hifas como la germinación de esporas y reduce la producción de toxinas. Recientemente, se ha demostrado que el quitosano incrementa la producción de conidios en hongos filamentosos, incluso a concentraciones a las que el crecimiento de las hifas esta bloqueado. En conjunto dichas observaciones sugieren que el quitosano ejerce su actividad antiflingica por múltiples mecanismos.

Por airo lado, cas es más soluble yactivo biológicamente que el quitosano (Kim SK., Rajapakse N. , 2005, Carbohyd Polym., 62:357-368) . La actividad biOlógica del quitosano y del COS depende de su peso molecular, grado de deacetilación y pH del medio. La actividad antibiótica del quitosano y del COS se debe a la permeabilización de las membranas plasmáticas bacterianas (Liu H., Du Y., Wang X., Sun L., 2004, International joumal of food microbio/o9'Y, 95:147-155) . De igual forma los efectos antifúngicos del quitosano en levaduras y hongos filamentosos son debidos al daño que este compuesto causa a sus memtlranas plasmáticas. La sensibilidad fúngica al

quitosano depende de la fluidez de la membrana. La permeabilización de la membrana plasmática por quitosano también se ha detectado (indirectamente) en Saccharomyces cerevisiae, ya que la deleción de genes codificantes para proteínas implicadas en el mantenimiento de la integridad de la membrana plasmática incrementó la sensibilidad al quitosano en dicho microorganismo (Zakrzewska A. , et al., 2007, Eukar y otic ce", 6:600-608) .

Los COS son no-tóxicos para mamíferos, por lo que son de particular interés para su uso como antifúngicos en diversas aplicaciones. No obstante, debido a que muchos de los hongos patógenos pueden desarrollé:u resistencias al tratamiento prolongado con quitosano o con COS, es deseable mejorar la acción antifúngica del mismo mediante la identificación de dianas moleculares cuya inhibición/activación contribuya a mejorar el efecto de dicho compuesto en la muerte o inhibición del crecimiento de células eucariotas, preferiblemente de hongos. ¡6, demás, mediante la identificación de dichas dianas moleculares de quitosano o de COS, se consigue incrementar el conocimiento del modo de acción antifúngico de este c1Jmpuesto.

DESCRIPCiÓN DE LA INVENCiÓN

En los ejemplos de la presente invención se muestra que el uso combinado de quitosano, o de oligosacáridos del quitosano, con el antifúngico f1uconazol presenta un efecto sinérgico en la inhibición del crecirniento de células eucariotas.

Tras el uso combinado de quitosano, o ~¡us oligosacáridos, con fluconazol se observa una dramática disminución del crE!cimiento celular de células eucariotas, preferiblemente de hongos. La combinalción de quitosano, o de sus oligosacáridos, preferiblemente de COS, más preferiblE!menle de COS-5.44, y fluconazol actúa de modo sinérgico, ya que la combinación de ambos compuestos inhibe el crecimiento celular en mayor medida que la suma de! la inhibición del crecimiento celular causada por cada uno de estos dos compuestos individualmente.

Por ello, un primer aspecto de la invención se refiere a una composición, de ahora en adelante "composición de la invenciónH que comprende quitosano, o un oligosacárido ,

de quitosano, y f1uconazol. Preferiblemente, esta composición de la invención comprende COS, más preferiblemenle COS-5.44, y Huconazol.

La "célula eucariotan a la que se refiere la presente invención puede proceder de cualquier organismo eucariota, aunque preferiblemente procede de un hongo o de un mamifero. El término "hongo~, tal y como se utiliza en la presente invención, se refiere tanto a hongos filamentosos como a lev'aduras. Preferiblemente, el hongo al que se refiere la presente invención se selecciona de la lista que comprende: S. cerevisiae, Zygosaccharomyces bailii, Gandida a/bicans, Gandida glabrata, Botr y tis cinerea, Fusarium oxysporum, Aspergillus fumiga tus, Gr y ptococcus neoformans, Trichosporon spp., Malassezia spp., Scedosporium spp. o cualquiera de los hongos descritos como sensibles a quitosano en Palma Guerrem et al., 2008, Joumal of Applied Microbiology, 104 (2) : 541-553.

En la presente invención se entiende por "quitosano" el polisacárido lineal compuesto de cadenas distribuidas aleatoriamente de p. (1-4) D-glucosamina (unidades deacetiladas) y de N-acetil-D-glucosamina (unidad acetilada) obtenido por Ndeacetilación parcial de la quitina, y que posee efectos inhibidores del crecimiento de hongos y bacterias.

Un "oligosacárido de quitosanon o "cos" es aquel oligosacárido del quitosano que presenta cadenas cortas, preferiblemente de un tamaño <1-10 KDa, obtenido por la hidrólisis ácida o la rotura enzimática dE! los enlaces glicosídicos de las cadenas de quitosano, y que presenta efectos inhibidores del crecimiento de hongos y bacterias. Preferiblemente, el cas al que se refiere la presente invención es CaS-5.44.

El "f1uconazor es un medicamento trialzol antimicótico usado en el tratamiento y prevención de infecciones fúngicas superficiales y sistémicas, y disponible comercialmente.

Otro aspecto de la invención se refiere al uso de la composición de la invención como antifúngico.

El término "antifúngicon se refiere a un cC1mpuesto que inhibe el crecimiento del hongo sin llegar a provocar su muerte (fungistático) , o que destruye, es decir, provoca la muerte, del hongo (fungicida) . Este uso como agente antifúngico de la composición de la invención se refiere a un uso ex vivo. Así, la composición de la invención puede ser utilizada como antifúngico en diversé:IS aplicaciones, por ejemplo, aunque sin limitamos, en la industria textil; en la industria alimentaria, como por ejemplo, para el recubrimiento de alimentos con el fin de evitar su contaminación microbiana y, por tanto, de evitar una potencial intoxicación en el cuerpo humano o animal una vez que el alimento es ingerido; en agricultura, como por ejemplo, en tratamientos fitosanitarios, preferiblemente en infecciones causadas por Botr y tis cinerea o Fusarium oxysporum; o como detergente, por ejemplo, para la limpieza de diversas superficies.

La expresión "ex vivoM se refiere a que 113 célula eucariota tratada con la composición de la invención se encuentra fuera del cuerpo humano o animal.

Otro aspecto de la invención se refiere al uso de la composición de la invención para la elaboración de un medicamento, o alternativamente, a la composición de la invención para su uso como medicamento. En una realización preferida, el medicamento es para el tratamiento y/o prevención de infeicciones fúngicas. Más preferiblemente, la infección fúngica es producida por hongos tales como por ejemplo, aunque sin limitamos, S. cerevisiae, Zygosaccharomyces bail;;, Gandida albicans, Gandida glabrata, Aspergillus fumigatus, Cr y ptococcus neoformans, Trichosporon spp., Malassezia spp. o Scedosporium spp .. Aun más preferiblemente, la infección fúngica se produce en humanos.

El término "medicamentoM en la presentl:! invención se refiere a un medicamento de uso humano o veterinario. El "medicamento de uso humano~ es toda sustancia o combinación de sustancias que se preSEtnte como poseedora de propiedades para el tratamiento o prevención de enfermedadl=s en seres humanos o que pueda usarse en seres humanos o administrarse a seres humanos con el fin de restaurar, corregir o modificar las funciones fisiológicas ejercil~ndo una acción farmacológica, inmunológica

o metabólica, o de establecer un dial:;1nóstico médico. El "medicamento de uso veterinarioM es toda sustancia o combinación de sustancias que se presente como poseedora... [Seguir leyendo]

1. Composición que comprende quitosano, o un oligosacárido de quitosano, y

f1uconazol. 5

2. Uso ex vivo de la composición senún la reivindicación 1, como antifúngico.

3. Uso de la composición según la reivindicación 1, para la elaboración de un medicamento.

4. Uso de la composición según la reivindicación 1 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de infecciones fúngicas.