Anticuerpos que se unen a células dendríticas y epiteliales humanas 205 (DEC-205).

Un anticuerpo monoclonal aislado que se une con el receptor 205 de Células Dendríticas y Epiteliales (DEC-205)humano y comprende:

una CDR1 de región variable de cadena pesada que comprende SEC ID Nº: 29;

una CDR2 de región variable de cadena pesada que comprende SEC ID Nº:30;

una CDR3 de región variable de cadena pesada que comprende SEC ID Nº: 31;

una CDR1 de región variable de cadena ligera que comprende SEC ID Nº: 35;

una CDR2 de región variable de cadena ligera que comprende SEC ID Nº: 36; y

una CDR3 de región variable de cadena ligera que comprende SEC ID Nº: 37.

Anticuerpos que se unen a células dendríticas y epiteliales humanas 205 (DEC-205)

Solicitudes relacionadas La presente solicitud reivindica beneficio de prioridad de la Solicitud Provisional de Estados Unidos Nº 61/002253, presentada el 7 de noviembre de 2007 y la Solicitud Provisional de Estados Unidos Nº 61/191551, presentada el 10 de septiembre de 2008.

Antecedentes de la invención Las células dendríticas (DC) son células especializadas del sistema inmunitario. Las DC tienen la capacidad única de iniciar respuestas de linfocitos T y B primarias y secundarias presentando antígenos en forma de péptidos unidos con moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de superficie celular. La función de presentación de antígenos de las células dendríticas se ha correlacionado con la expresión de alto nivel del receptor de células dendríticas y epiteliales humanas 205 (DEC-205) (Jiang et al. (1995) Nature 375 (11) 151) .

DEC-205 es un receptor endocítico hallado principalmente en células dendríticas, pero también se encuentra en linfocitos B, capilares cerebrales, estroma de la médula ósea, epitelios de vellosidades intestinales y vías respiratorias pulmonares, así como el epitelio cortical del timo y las células dendríticas en las áreas de linfocitos T de órganos linfoides periféricos. DEC-205 se expresa a altos niveles en DC en las áreas de linfocitos T de órganos linfoides (Kraal et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 981; Witmer-Pack et al. (1995) Cell. Immunol. 163: 157) . DEC-205 tiene diez dominios de lectinas de tipo C contiguos, externos a la membrana (misma referencia; Mahnke et al. (2000)

J. Cell Biol. 151: 673) que median en el procesamiento eficaz y la presentación de antígenos en productos de MHC de clase II in vivo (Hawiger et al. (2001) J. Exp. Med. 194: 769) . Se ha mostrado que cantidades pequeñas de antígeno inyectado, dirigidas a DC por la vía adsorbente de DEC-205, son capaces de inducir tolerancia de linfocitos T CD8+ periféricos sólida (Bonifaz et al. (2002) J. Exp. Med. 196 (12) : 1627) .

A pesar de avances recientes en la caracterización de las células dendríticas, se sabe muy poco con respecto a receptores específicos de células dendríticas, tales como DEC-205, y están disponibles pocos reactivos que sean específicos de células dendríticas. Los reactivos, en particular anticuerpos, que reaccionan específicamente o preferentemente con células dendríticas, tal como mediante DEC-205, tienen gran potencial como agentes de dirección para inducir respuestas inmunitarias potentes a antígenos de enfermedad infecciosa o tumoral. Estos agentes de dirección específica a células también podrían modificarse por ingeniería genética para suministrar toxinas para eliminar células presentadoras de antígenos potentes (por ejemplo, células dendríticas) en médula ósea y trasplantes de órganos u otros trastornos autoinmunitarios. En consecuencia, dichos agentes de unión específicos de células dendríticas poseen gran valor terapéutico y diagnóstico.

Sumario de la invención La presente invención proporciona un anticuerpo monoclonal aislado que se une con el receptor 205 de Células Dendríticas y Epiteliales humanas (DEC-205) y comprende: una CDR1 de región variable de cadena pesada que comprende SEC ID Nº: 29; una CDR2 de región variable de cadena pesada que comprende SEC ID Nº:30; una 45 CDR3 de región variable de cadena pesada que comprende SEC ID Nº: 31; una CDR1 de región variable de cadena ligera que comprende SEC ID Nº: 35; una CDR2 de región variable de cadena ligera que comprende SEC ID Nº: 36; y una CDR3 de región variable de cadena ligera que comprende SEC ID Nº: 37. La presente invención también proporciona conjugados de vacunas, moléculas biespecíficas y composiciones terapéuticas que contienen dichos anticuerpos. En consecuencia, los anticuerpos y composiciones de la invención pueden usarse en una diversidad de 50 terapias dirigidas a células dendríticas, por ejemplo, para potenciar la presentación de antígenos y/o inducir respuestas de linfocitos T, tales como respuestas de linfocitos T citotóxicos (CTL) , contra una diversidad de células o patógenos diana o para tratar enfermedades mediadas por células presentadoras de antígenos (APC) .

En una realización, los anticuerpos de la presente invención son anticuerpos monoclonales humanos que se unen 55 con DEC-205 humano con una constante de afinidad de al menos 108 M-1 como se mide por resonancia de plasmón superficial y opcionalmente muestran al menos una de las siguientes propiedades: (a) internalización después de unión con células dendríticas humanas que expresan DEC-205; (b) generación o potenciación de respuestas de linfocitos T humanos a un antígeno (que puede estar unido al anticuerpo) , mediado adecuadamente por rutas del MHC de Clase I y/o Clase II; (c) generación o potenciación de respuestas de CTL o NKT humanos a un antígeno; (d)

localización en compartimentos de procesamiento de antígenos en células dendríticas; y (e) inducción de la tolerancia a linfocitos T CD8+ periférica; o (f) unión con un anticuerpo localizado en el dominio extracelular de DEC205 humano, por ejemplo, en uno o una combinación del dominio rico en cisteína, el dominio FnII o uno o más de los diez dominios de tipo lectinas de tipo C. Además, los anticuerpos pueden reaccionar de forma cruzada con DEC-205 en células dendríticas de primate no humano o las de otras especies.

En una realización adicional, los anticuerpos aislados de la invención se unen con DEC-205 humano e incluyen una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera incluyendo las secuencias de aminoácidos de SEC ID Nº: 28 y 34, respectivamente.

También se incluyen en la presente invención anticuerpos aislados que incluyen regiones variables de cadena pesada y ligera que tienen al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% o más identidad de secuencia con cualquiera de las secuencias anteriores. También se pretende que estén abarcados por la presente invención intervalos intermedios a los valores anteriormente enumerados, por ejemplo, regiones variables de cadena pesada y ligera que tienen al menos 80-85%, 85-90%, 90-95% o 95-100% de identidad de secuencia con cualquiera de las secuencias anteriores.

El anticuerpo aislado puede incluir una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 28, o secuencias en las que al menos un resto de aminoácido en la región marco conservada de la región variable de cadena pesada está sustituido con el resto de línea germinal correspondiente. El

anticuerpo puede incluir además una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 34, o secuencias en las que al menos un resto de aminoácido en la región marco conservada de la región variable de cadena ligera se sustituye con el resto de línea germinal correspondiente. El resto de aminoácido sustituido puede incluir: un resto que se une de forma no covalente directamente con el antígeno; un resto adyacente a una CDR; un resto que interacciona con CDR; un resto que participa en la interfaz VL-VH, un resto canónico, un resto de zona de vernier o un resto de empaquetamiento intercatenario.

Los anticuerpos de la invención pueden ser de longitud completa, por ejemplo, cualquiera de los siguientes isotipos: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD e IgE. Como alternativa, los anticuerpos pueden ser fragmentos tales como una parte de unión a antígeno o un anticuerpo monocatenario (por ejemplo, un fragmento Fab, F (ab’) 2, Fv, Fv de cadena sencilla, una región determinante de complementariedad aislada (CDR) o una combinación de dos o más CDR aisladas) .

La invención también proporciona un conjugado molecular que comprende un anticuerpo de la invención unido a un antígeno (incluyendo fragmentos, epítopos y determinantes antigénicos) , tal como componente de un patógeno, un antígeno tumoral o un autoantígeno. Por ejemplo, el antígeno puede incluir un antígeno tumoral, tal como !hCG, gp100 o Pmel17, CEA, gp100, TRP-2, NY-BR-1, NY-CO-58, MN (gp250) , idiotipo, Tirosinasa, Telomerasa, SSX2, MUC-1, MAGE-A3, y antígeno asociado a melanoma de alto peso molecular (HMW-MAA) MART1, melan-A, NY-ESO-1, MAGE-1, MAGE-3, WT1, Her2, mesotelina o antígeno asociado a melanoma de alto peso molecular (HMW-MAA) .

La expresión “antígeno tumoral” como se usa en el presente documento preferentemente significa cualquier antígeno o determinante antigénico que esté presente en (o asociado con) una célula tumoral y no típicamente en células normales,... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal aislado que se une con el receptor 205 de Células Dendríticas y Epiteliales (DEC-205) humano y comprende:

una CDR1 de región variable de cadena pesada que comprende SEC ID Nº: 29; una CDR2 de región variable de cadena pesada que comprende SEC ID Nº:30; una CDR3 de región variable de cadena pesada que comprende SEC ID Nº: 31; una CDR1 de región variable de cadena ligera que comprende SEC ID Nº: 35; una CDR2 de región variable de cadena ligera que comprende SEC ID Nº: 36; y una CDR3 de región variable de cadena ligera que comprende SEC ID Nº: 37.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1 que comprende una región variable de cadena pesada que comprende SEC ID Nº: 28 y una región variable de cadena ligera que comprende SEC ID Nº: 34 o una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera codificada por SEC ID Nº: 26 y 32, respectivamente.

3. El anticuerpo de la reivindicación 1, que es un anticuerpo monoclonal humano que se une con DEC-205 humano con una constante de afinidad de al menos 108 M-1 como se determina por resonancia de plasmón superficial y muestra opcionalmente al menos una de las siguientes propiedades:

(a) se internaliza después de unirse con células dendríticas humanas que expresan DEC-205;

(b) genera o potencia respuestas de linfocitos T CD4+ humanos a un antígeno donde la respuesta de linfocitos T humanos está mediada opcionalmente por rutas del MHC de Clase I o Clase II o ambas;

(c) genera o potencia respuestas de CTL o NKT humanas a un antígeno;

(d) se localiza en compartimentos de procesamiento de antígenos en células dendríticas;

(e) induce tolerancia a linfocitos T CD8+ periféricos; o

(f) se une con un anticuerpo localizado en el dominio extracelular de DEC-205 humano.

4. El anticuerpo de la reivindicación 1 o 2, en el que el anticuerpo es un anticuerpo humano.

5. El anticuerpo de la reivindicación 1 o 2, en el que el anticuerpo es un anticuerpo quimérico que es un anticuerpo IgG2, IgG3, IgE, IgA, IgM o IgD; o es un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo IgG1, un IgG2, un IgG3, un IgG4, un IgM, un IgA1, un IgA2, un IgAsec, un IgD y un IgE.

6. Un vector de expresión que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

7. Una célula transformada con un vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 6.

8. Un conjugado molecular que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, unido con un antígeno, un alérgeno o un autoantígeno.

9. El conjugado molecular de la reivindicación 8, en el que el antígeno se selecciona del grupo que consiste en un componente de un patógeno tal como VIH, VPH, VHB o VHC, un antígeno tumoral tal como !hCG, gp100 o Pmel17, HER2/neu, WT1, mesotelina, CEA, gp100, MART1, TRP-2, NY-BR-1, NY-CO-58, MN (gp250) , idiotipo, Tirosinasa, Telomerasa, SSX2, MUC-1, MART1, melan-A, NY-ESO-1, MAGE-1, MAGE-3, MAGE-A3 y antígeno asociado a melanoma de alto peso molecular (HMW-MAA) .

10. El conjugado molecular de la reivindicación 8 o 9, que comprende además un agente terapéutico seleccionado del grupo que consiste en un agente citotóxico, un agente inmunosupresor, y un agente quimioterapéutico.

11. Una molécula biespecífica que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 unido con una molécula que tiene una especificidad de unión que es diferente de la del anticuerpo.

12. Una composición que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un vehículo farmacéuticamente eficaz, y que comprende opcionalmente además un agente terapéutico.

13. Uso de la composición de la reivindicación 12 o el conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 en la preparación de un medicamento para uso en el tratamiento de cáncer o una enfermedad autoinmunitaria.

14. La composición de la reivindicación 11 o el conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 para uso en el tratamiento de un trastorno en un sujeto, la inmunización de un sujeto, o la inducción o potenciación de una respuesta inmunitaria contra un antígeno en un sujeto.

15. Un método para detectar la presencia o ausencia de DEC-205 en una muestra biológica, que comprende:

(a) poner en contacto una muestra biológica con el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde el anticuerpo está marcado con una sustancia detectable; y

(b) detectar el anticuerpo unido con DEC-205 para detectar de este modo la presencia o ausencia de DEC-205 en la muestra biológica.