Anticuerpos optimizados que seleccionan como diana CD19.

Anticuerpo que se une a CD19, que comprende

una CDR1 de cadena pesada,

una CDR2 de cadena pesada y una CDR3 de cadena pesada representadas en SEQ ID NO: 40; y

una CDR1 de cadena ligera, una CDR2 de cadena ligera y una CDR3 de cadena ligera representadas en SEQ ID NO: 58, en el que la numeración es según Kabat.

Anticuerpos optimizados que seleccionan como diana CD19

Antecedentes Células B

Las células B son linfocitos que desempeñan un amplio papel en la respuesta inmunitaria humoral. Se producen en la médula ósea de la mayoría de mamíferos y representan el 5-15% de la reserva linfoide circulante. La principal función de las células B es producir anticuerpos contra diversos antígenos y constituyen un componente esencial del sistema inmunitario adaptativo.

El cuerpo humano produce millones de tipos diferentes de células B cada día que circulan en la sangre y la linfa desempeñando el papel de la vigilancia inmunitaria. Las células B, también denominadas linfocitos B, no producen anticuerpos hasta que se activan completamente. Cada célula B tiene una proteína receptora única (denominada receptor de células B (BCR) ) en su superficie que se unirá a un antígeno particular. El BCR es una inmunoglobulina unida a membrana y esta molécula es la que permite la distinción de las células B de otros tipos de linfocitos, al tiempo que es el principal receptor implicado en la activación de las células B. Una vez que una célula B encuentra su antígeno relacionado y recibe una señal adicional de una célula T cooperadora, puede diferenciarse adicionalmente en diversos tipos de células B enumerados más adelante. La célula B o bien puede convertirse en uno de estos tipos celulares directamente o bien puede experimentar una etapa de diferenciación intermedia, la reacción del centro germinal, en la que la célula B hipermutará la región variable de su gen de inmunoglobulina y posiblemente experimentará cambio de clase.

El desarrollo de las células B se produce a través de varias fases, representando cada fase un cambio en el contenido de genoma en los loci del anticuerpo. Las fases del desarrollo de las células B incluyen células B progenitoras, células pro-B tempranas, células pro-B tardías, células pre-B grandes, células pre-B pequeñas, células B inmaduras y células B maduras.

Las células B maduras pueden dividirse en cuatro tipos principales:

Las células B-1 expresan CD5, un marcador encontrado habitualmente en las células T. Las células B-1 también expresan IgM en mayores cantidades que IgG. Secretan anticuerpos polirreactivos de baja afinidad naturales encontrados en el suero y que a menudo tienen especificidades dirigidas hacia autoantígenos y polisacáridos bacterianos comunes. Las células B-1 están presentes en bajo número en los ganglios linfáticos y en el bazo y en cambio se encuentran predominantemente en las cavidades peritoneal y pleural.

Las células B-2 son las células B convencionales a las que se refieren la mayoría de los textos. Residen en la médula ósea, el bazo y los ganglios linfáticos. Viven poco tiempo y cuando se activan por antígenos pueden diferenciarse en células B de memoria que producen IgG. En el transcurso de estas respuestas de anticuerpos, la IgG puede experimentar maduración de la afinidad sustancial.

Las células B plasmáticas (también conocidas células plasmáticas) son células B grandes que se han expuesto al

antígeno y producen y secretan grandes cantidades de anticuerpos, que ayudan en la destrucción de microbios uniéndose y facilitando la selección como diana por fagocitos, así como la activación del sistema del complemento. Las células plasmáticas se denominan en ocasiones fábricas de anticuerpos.

Las células B de memoria se forman a partir de células B activadas que son específicas para el antígeno encontrado durante la respuesta inmunitaria primaria. Estas células viven mucho tiempo y pueden responder rápidamente tras una segunda exposición al mismo antígeno.

Cuando una célula B omite alguna etapa del proceso de maduración, morirá mediante un mecanismo denominado apoptosis. Si reconoce un autoantígeno durante el proceso de maduración, la célula B se suprimirá (lo que se 55 conoce como anergia) o experimentará apoptosis. Las células B se producen continuamente en la médula ósea, pero sólo una pequeña parte de las células B recién formadas sobreviven para participar en la reserva de células B periférica que viven mucho tiempo.

En los últimos años, han surgido datos que sugieren que los linfocitos B desempeñan un papel más amplio en las respuestas inmunitarias y no son meramente los receptores pasivos de señales que dan como resultado la diferenciación en células plasmáticas productoras de anticuerpos. Junto con sus papeles tradicionales como células presentadoras de antígenos y precursores de células plasmáticas productoras de anticuerpos, también se ha encontrado que las células B regulan las funciones de las células presentadoras de antígenos (APC) y de las células T, producen citocinas y expresan pares de receptor/ligando, lo que anteriormente se había pensado que estaba 65 limitado a otros tipos de células.

Trastornos de células B

Debido a su papel crítico en la regulación del sistema inmunitario, la desregulación de células B está asociada con una variedad de trastornos. Los trastornos de las células B, también denominados en el presente documento enfermedades relacionadas con células B, se dividen en proliferación excesiva o no controlada (linfomas, leucemias) y defectos del desarrollo de células B/producción de inmunoglobulinas (inmunodeficiencias) La mayoría de los casos de linfoma (80%) tienen como origen las células B. Estos incluyen el linfoma no Hodgkin (LNH) , la leucemia linfoblástica aguda (LLA) y enfermedades relacionadas con la autoinmunidad.

El LNH es un tumor maligno heterogéneo que se origina a partir de linfocitos. En los Estados Unidos (EE. UU.) , se estima que la incidencia es de 65.000/año con una mortalidad de aproximadamente 20.000 (American Cancer Society, 2006; y SEER Cancer Statistics Review) . La enfermedad puede producirse en todas las edades, iniciándose la aparición habitual en adultos mayores de 40 años, aumentando la incidencia con la edad. El LNH se caracteriza por una proliferación clonal de linfocitos que se acumulan en los ganglios linfáticos, la sangre, la médula ósea y el

bazo, aunque puede resultar implicado cualquier órgano principal.

El diagnóstico y la caracterización histológica del LNH se realizan usando una combinación de criterios morfológicos e inmunofenotípicos. El sistema de clasificación actual usado por patólogos y clínicos es la clasificación de tumores de la Organización Mundial de la Salud (OMS) que organiza al LNH en neoplasmas de células T o células B precursoras y maduras. La PDQ divide actualmente el LNH como indolente o agresivo para la entrada en ensayos clínicos. Por coherencia, el presente documento también usará una división similar. El grupo de LNH indolente comprende principalmente subtipos foliculares, linfoma linfocítico pequeño, MALT y de zona marginal; indolente engloba a aproximadamente el 50% de los pacientes con LNH de células B recién diagnosticado. El LNH agresivo incluye pacientes con diagnósticos histológicos principalmente de células B grandes difusas (el 40% de todos los pacientes recién diagnosticados tienen células grandes difusas) , de Burkitt y de células del manto.

La evolución clínica del LNH es altamente variable. Un determinante principal de la evolución clínica es el subtipo histológico. Se considera que la mayoría de los tipos indolentes de LNH son enfermedades incurables. Los pacientes responden inicialmente o bien a quimioterapia o bien a terapia con anticuerpos y la mayoría sufrirán recidiva. Los estudios hasta la fecha no han demostrado una mejora en la supervivencia con la intervención temprana. En pacientes asintomáticos, resulta aceptable “observar y esperar” hasta que el paciente se convierte en sintomático o el ritmo de la enfermedad parece acelerarse. A lo largo del tiempo, la enfermedad puede transformarse en una histología más agresiva. La mediana de supervivencia es de 8 a 10 años y los pacientes indolentes a menudo reciben 3 o más tratamientos durante la fase de tratamiento de su enfermedad. El tratamiento inicial del

paciente con LNH indolente sintomático ha sido históricamente quimioterapia de combinación. Los agentes usados más comúnmente incluyen: ciclofosfamida, vincristina y prednisona (CVP) ; ciclofosfamida, adriamicina, vincristina, prednisona (CHOP) ; o el análogo de purina, fludarabina. Aproximadamente del 70% al 80% de los pacientes responderán a su quimioterapia inicial, siendo la duración de las remisiones del orden de 2-3 años. Finalmente, la mayoría de los pacientes sufren recidiva. El descubrimiento y el uso clínico del anticuerpo anti-CD20, rituximab, ha proporcionado mejoras significativas en la tasa de respuesta... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo que se une a CD19, que comprende una CDR1 de cadena pesada, una CDR2 de cadena pesada y una CDR3 de cadena pesada representadas en SEQ ID NO: 40; y

una CDR1 de cadena ligera, una CDR2 de cadena ligera y una CDR3 de cadena ligera representadas en SEQ ID NO: 58, en el que la numeración es según Kabat.

2. Anticuerpo según la reivindicación 1, en el que dicha cadena pesada comprende SEQ ID NO: 40.

3. Anticuerpo según la reivindicación 1, en el que dicha cadena ligera comprende SEQ ID NO: 58.

4. Anticuerpo según la reivindicación 1, en el que dicha cadena pesada comprende SEQ ID NO: 40 y dicha secuencia de cadena ligera comprende SEQ ID NO: 58.

5. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 1-4, que comprende además un dominio Fc que tiene sustitución de aminoácido de S239D, en comparación con SEQ ID NO: 7, en el que la numeración es según el índice EU como en Kabat.

6. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 1-4, que comprende además un dominio Fc que tiene sustitución de aminoácido de I332E, en comparación con SEQ ID NO: 7, en el que la numeración es según el índice EU como en Kabat.

7. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 1-4, que comprende además un dominio Fc que tiene sustituciones de aminoácido de S239D e I332E, en comparación con SEQ ID NO: 7, en el que la numeración es según el índice EU como en Kabat.

8. Composición que comprende una pluralidad de anticuerpos glicosilados según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en la que aproximadamente e.

8. 100% del anticuerpo glicosilado en la composición comprende una estructura de hidrato de carbono central madura que carece de fucosa.

9. Composición farmacéutica que comprende un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 y un portador farmacéuticamente aceptable.

10. Ácido nucleico que codifica para una secuencia de cadena pesada y una secuencia de cadena ligera variable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4.

11. Anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 o composición según una cualquiera de las reivindicaciones 8-9, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno seleccionado del grupo que consiste en linfomas no Hodgkin (LNH) , leucemia linfocítica crónica (LLC) , linfoma/leucemia linfoblástica aguda de células B (LLA-B) y linfoma de células del manto (LCM) .

12. Anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 o composición según una cualquiera de las reivindicaciones 8-9, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o un trastorno seleccionado del grupo que consiste en artritis reumatoide (AR) , lupus eritematoso sistémico (LES o lupus) , esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren y púrpura trombocitopénica idiopática (PTI) .