Uso de células madre del estroma derivadas del tejido adiposo en el tratamiento de fístula.

Células madre estromales derivadas del tejido adiposo para el uso en un método del tratamiento de una fístula o una herida en un sujeto,

en donde dichas células madre estromales derivadas del tejido adiposo son alogénicas con respecto al sujeto que va a ser tratado.

Uso de células madre del estroma derivadas del tejido adiposo en el tratamiento de fistula Descripción Antecedentes de la Invención [0001] Generalmente, una fístula es una conexión anormal o pasadizo entre órganos o vasos que normalmente no se conectan. Las fístulas pueden desarrollarse en varias partes del cuerpo. Por ejemplo, los tipos de fístulas, nombrados por las áreas del cuerpo en el que ocurren, incluyen la fístula anorrectal o fístula anal o fístula fecal (entre el recto u otra área anorrectal y la superficie de la piel) , fístula arteriovenosa o fístula AV (entre una arteria y una vena) , fístula biliar (entre los conductos de bilis y la superficie de la piel, a menudo causada por la cirugía de la vesícula biliar) , fístula cervical (apertura anormal en la cerviz) , fístula craneosinusal (entre el espacio intracraneal y un seno paranasal) , fístula enteroentérica (entre dos partes del intestino) , fístula enterocutánea (entre el intestino y la superficie de la piel, en particular desde el duodeno o el yeyuno o el íleon) , fístula enterovaginal (entre el intestino y la vagina) , fístula gástrica (entre el estómago y la superficie de la piel) , fístula metroperitoneal (entre la cavidad del útero y la cavidad peritoneal) , fístula perilinfática (una rotura entre las membranas entre el oído medio y el interno) , fístula arteriovenosa pulmonar (entre una arteria y una vena de los pulmones, resultando en un desvío de sangre) , fístula rectovaginal (entre el recto y la vagina) , fístula umbilical (entre el ombligo y el intestino) , fístula traqueoesofágica (entre los tubos utilizados al respirar y al comer) y fístula vésicovaginal (entre la vejiga y la vagina) . Las causas de fístulas incluyen trauma, complicaciones de un tratamiento médico y enfermedad.

El tratamiento para las fístulas varía dependiendo de la causa y la amplitud de la fístula, pero generalmente requiere intervención quirúrgica. Varios procedimientos quirúrgicos son comúnmente utilizados, más comúnmente la fistulotomía, la colocación de un setón de drenaje (una cuerda que es pasada por el trayecto de la fístula para mantenerla abierta para drenar) , o un procedimiento endorectal de la solapa (donde el tejido saludable es tirado sobre el lado interno de la fístula para evitar que las heces u otro material reinfecten el canal) . La cirugía de las fístulas anorectales no está sin efectos secundarios, incluyendo la reaparición, la reinfección y la incontinencia.

García-Olmo et al. (Diseases of the Colon & Rectum, 2005, 48 (7) , 1416-1423) describe la fase I de un ensayo clínico del tratamiento de la fístula de Crohn por el trasplante autólogo de células madre mesenquimales de origen adiposo.

García-Olmo et al. (International Journal of Colorectal Disease, 2003, 18 (5) , 451-454) describe el trasplante autólogo de células madre mesenquimales de origen adiposo para el tratamiento de la fístula rectovaginal en la enfermedad de Crohn perianal.

Las enfermedades inflamatorias intestinales, como la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa, son las causas principales de las fístulas anorectales, enteroentéricas, y enterocutáneas. La incidencia de fístulas reportada en la enfermedad de Crohn oscila de 17% a 50%. El manejo de las fístulas en pacientes con la enfermedad de Crohn sigue presentando un problema sumamente desafiante debido a que muchas de esas fístulas no responden a los tratamientos disponibles. Tales fístulas y su recurrencia son una complicación muy penosa que significativamente reduce la calidad de la vida de los pacientes afectados. Las recientes mejoras en el tratamiento médico (por ejemplo, el tratamiento con Infliximab®) y el experto manejo quirúrgico han disminuido la necesidad de la cirugía complicada. No obstante, muchos pacientes no son curados. La incapacidad de las fístulas para curarse es probablemente debida a la calidad sub-óptima de los tejidos que se han visto afectados por la enfermedad de Crohn. Verdaderamente, las fístulas de Crohn proporcionan un sistema modelo para la cura de heridas en algunas de las peores condiciones posibles.

Otra causa principal de las fístulas es el trauma, por ejemplo, por violación, o por heridas sostenidas durante el parto, a los tejidos de la vagina y la vejiga y/o recto conducentes a la fístula rectovaginal y la fístula vésicovaginal. Todos los años, aproximadamente 100, 000 mujeres a través del mundo en desarrollo sostienen tales fístulas (también conocidas como fístulas obstétricas) durante el parto obstruido. Durante el parto obstruido, la presión de la cabeza del bebé contra la pelvis de la madre corta el suministro de sangre a los tejidos delicados de la región. El tejido muerto se desprende y la mujer se queda con una fístula vésicovaginal y a veces una fístula rectovaginal. Esta apertura resulta en la incontinencia de orina y/o heces permanente. El Fondo de Población de las Naciones Unidas (FPNU) estima que la población del mundo de víctimas de fístula obstétrica es de más de dos millones. Este cálculo podría ser un subestimado significativamente. Las tasas de éxito para la reparación quirúrgica primaria oscilan del 88 al 93 por ciento pero disminuye con los atentos sucesivos. Por lo tanto, un porcentaje significativo de mujeres tienen fístulas obstétricas que no pueden ser reparadas quirúrgicamente.

Nuevas terapias para las fístulas son necesitadas.

Síntesis de la Invención

La invención proporciona células madre estromales derivadas del tejido adiposo para el uso en un método del tratamiento de una fístula o una herida en un sujeto, en donde dichas células madre estromales derivadas del tejido adiposo son alogénicas con respecto al sujeto que va a ser tratado.

Las composiciones de células madre estromales derivadas del tejido adiposo aquí descritas tienen un fenotipo único y exhiben una mayor homogeneidad de fenotipo que otras composiciones de células madre estromales derivadas del tejido adiposo descritas anteriormente, así haciéndolas más adecuadas para el uso en el tratamiento de fístulas y heridas que otras composiciones descritas anteriormente. Las composiciones de células madre estromales derivadas del tejido adiposo pueden ser formuladas con soluciones u otras sustancias para servir como fármacos o aparato médicos, por ejemplo, como suturas o adhesivos.

Estas realizaciones de la invención presente, otras realizaciones, y sus funciones y características serán aparentes por la descripción, dibujos, y reclamaciones siguientes.

Descripción Breve de las Figuras [0011]

La FIGURA 1 representa los resultados de caracterización de las células aisladas por los métodos del Ejemplo 1 por tinción de inmunofluorescencia. La frecuencia de las células inmunopositivas es indicada como sigue: -, menos de 5%; + /-, 6-15%; +, 16-50%; ++, 51-85%; y +++, 86-100%. P, Número de Pases.

La FIGURA 2 representa la caracterización de la inmunofluorescencia indirecta de células madre estromales derivadas del tejido adiposo. Las células del paciente #001 fueron pasadas 6 células después del implante no. 6. El color azul indica el núcleo teñido de DAPI. (A) CD90; (B) c-Kit; y (C) vimentin.

La FIGURA 3 resume los resultados clínicos obtenidos utilizando ciertos métodos y composiciones de la invención. F, Femenino; M, Masculino; NI, Ningún implante; NA, No analizado.

La FIGURA 4 muestra las curvas del crecimiento de las células derivadas de lipoaspirado a diferentes concentraciones de SFB (0.5, 2.5 y 10%, como indicado) . Los fibroblastos sinoviales humanos fueron cultivados en presencia de 5% o 10% de SFB. Las células número 6SD son mostradas en función de absorbencia en 595 nm. Los datos son de un experimento representativo con pocillos triplicados.

La FIGURA 5 representa la ampolla en la mucosa rectal después de que las células han sido inyectadas cerca a la apertura interna suturada.

La FIGURA 6 representa fotografías de una fístula antes (A) y ocho semanas después (B) de la inyección de las células.

La FIGURA 7A representa los histogramas de inmunocitometría de fluorescencia correspondientes al perfil de los marcadores de superficie (CD3, CD9, CD10, CD11b, CD13, CD14, CD15, CD16, CD18, CD19, CD28, CD29, CD31, CD34, CD36, CD38, CD44, CD45, CD49a, CD49b, CD49c, CD49d, CD49e y CD49f) obtenidos de las células aisladas de las muestras de liposucción de un paciente implicado en el ensayo, en el pase 6.

La FIGURA 7B representa histogramas de inmunocitometría de fluorescencia correspondientes al perfil de los marcadores de superficie (CD50, CD51, CD54, CD55, CD56, CD58, CD59, CD61, CD62E, CD62L, CD62P, CD90, CD95, CD102, CD104, CD105, CD106, CD133, CD166, glicoforina, microglobulina... [Seguir leyendo]

Reivindicaciones

1. Células madre estromales derivadas del tejido adiposo para el uso en un método del tratamiento de una fístula o una herida en un sujeto, en donde dichas células madre estromales derivadas del tejido adiposo son alogénicas con respecto al sujeto que va a ser tratado.

2. Las células madre estromales derivadas del tejido adiposo según la reivindicación 1, para el uso de esa reivindicación, en el que dichas células madre estromales derivadas del tejido adipose incluyen:

a. una célula madre estromale derivada del tejido adiposo contenendo una composición, ela la cual al menos aproximadamente 50% de las células madre estromales derivadas del tejido adiposo que comprenden la composición expressan los marcadores CD9, CD10, CD 13, CD29, CD44, CD49A, CD51, CD54, CD55, CD58, CD59, CD90 y CD105, opcionalmente en el que menos de aproximadamente 5% células madre estromales derivadas del tejido adiposo que comprenden la composición expressan los marcadores CD34, CD11b, CD14, CD15, CD16, CD31, CD34, CD45, CD49f, CD 102, CD104, CD 106 y/o CD133; o

b. una célula madre estromale derivada del tejido adiposo que expressa el c-Kit, vimentina y marcadores CD90 y no expressa los marcadores CD34, Factor VIII, actina alfa, desmina, S-100 y keratina.

3. Las células madre estromales derivadas del tejido adiposo según la reivindicación 1, para el uso de esa reivindicación, el la que una composición farmacéutica comprendendo las células comprende al menos 10 x 106 células madre estromales derivadas del tejido adiposo.

4. Las células madre estromales derivadas del tejido adiposo según la reivindicación 1, para el uso de esa reivindicación, en la que la fistula es anorrectal o la fístula anal o la fístula fecal, la fístula arteriovenosa o la fístula de AV, la fístula biliar, la fístula cervical, la fístula craneosinusal, la fístula enteroentérica, la fístula enterocutánea, la fístula enterovaginal, la fístula gástrica, la fístula perilinfática, la fístula metroperitoneal, la fístula arteriovenosa pulmonar, la fístula rectovaginal, la fístula umbilical, la fístula traqueoesofágica y la fístula vésicovaginal.

5. Las células madre estromales derivadas del tejido adiposo según la reivindicación 4, para el uso de esa reivindicación, en la que la fistula es anorrectal, enterorectal, enterocutánea, rectovaginal o vésicovaginal.

6. Las células madre estromales derivadas del tejido adiposo según la reivindicación 1, para el uso de esa reivindicación, en la que las mencionadas células son administradas en combinación com un agente terapéutico al sujeto en tratamiento.

7. Las células madre estromales derivadas del tejido adiposo según la reivindicación 2, para el uso de esa reivindicación, en la que la al menos 10 x 106 células madre estromales derivadas del tejido adiposo son entregues en la herida después de cerrada la herida con una sutura.