Tratamiento de combinación para el tratamiento de infección por virus de la hepatitis C.

Inhibidor de mir-122 para el tratamiento de infección por virus de la hepatitis C (VHC) o hiperlipidemia o hipercolesterolemia o para la prevención o el tratamiento de aterosclerosis,

en el que dicho inhibidor de miR-122 es un oligonucleótido antisentido de secuencia 5’-CcAttGTcaCaCtCC-3’, y en el que las letras minúsculas representan ADN, las letras mayúsculas representan ANB y todas las C de ANB son 5’-metil-citosina y todos los enlaces internucleosídicos son enlaces fosforotioato, y en el que el inhibidor de miR-122 debe usarse en combinación con un inhibidor adicional de ensamblaje de VLDL que es o bien un compuesto oligomérico antisentido que comprende una secuencia de nucleobases que es complementaria a una región correspondiente del ARNm de apoB-100 o un compuesto hipocolesterolemiante seleccionado del grupo que consiste en resinas secuestradoras de sales biliares (por ejemplo, colestiramina, colestipol y clorhidrato de colesevelam), inhibidores de HMGCoA reductasa (por ejemplo, lovastatina, cerivastatina, prevastatina, atorvastatina, simvastatina y fluvastatina), ácido nicotínico, derivados de ácido fíbrico (por ejemplo, clofibrato, gemfibrozilo, fenofibrato, bezafibrato y ciprofibrato), probucol, neomicina, dextrotiroxina, ésteres de estanoles vegetales, inhibidores de la absorción de colesterol (por ejemplo, ezetimiba), implitapida, inhibidores de transportadores de ácidos biliares (transportadores de ácidos biliares dependientes de sodio apicales), reguladores de CYP7a hepática, agentes terapéuticos de sustitución de estrógeno (por ejemplo, tamoxifeno), antiinflamatorios (por ejemplo, glucocorticoides) y estatinas.

Tratamiento de combinación para el tratamiento de infección por virus de la hepatitis C

Campo de la invención La presente invención proporciona composiciones y métodos útiles para el tratamiento de infección por virus de la hepatitis C. En particular, esta invención se refiere al uso de una combinación de compuestos, uno que puede inhibir miR-122 y otro que puede inhibir Apo-B100 o alternativamente inhibir otra molécula en la ruta de ensamblaje de VLDL. La inhibición de miR-122 en combinación con la inhibición de la ruta de ensamblaje de VLDL, es decir Apo-B100, es beneficiosa para el tratamiento de infección por virus de la hepatitis C.

Antecedentes Aproximadamente 150-200 millones de personas en todo el mundo presentan infección crónica por virus de la hepatitis C (VHC) . La infección puede provocar inflamación hepática (hepatitis) que con frecuencia es asintomática, pero una hepatitis crónica posterior puede dar más tarde como resultado cirrosis (cicatrización fibrótica del hígado) y cáncer de hígado.

El virus de la hepatitis C (VHC) se propaga mediante contacto sangre-sangre con la sangre de una persona infectada. Los síntomas pueden tratarse médicamente, y puede aclararse el virus de una proporción de pacientes mediante un ciclo largo de medicamentos antivirales. Aunque una intervención médica temprana es útil, con frecuencia las personas con infección por VHC experimentan síntomas leves, y por consiguiente no buscan tratamiento. En los EE.UU., las personas con una historia de uso de drogas intravenosas, uso de drogas inhaladas,

tatuajes o que se han expuesto a sangre mediante relaciones sexuales sin protección o prácticas sociales corren un riesgo aumentado de adquirir esta enfermedad. La hepatitis C es la causa principal de trasplante de hígado en los Estados Unidos.

miR-122 es un microARN específico del hígado, bien conservado dentro de los vertebrados. miR-122 está implicado en el metabolismo del colesterol (Esau et al. 2005) y recientemente se ha mostrado que miR-122 es importante para la replicación del virus de la hepatitis C (VHC) (Jopling et al. 2005 y documento WO 2005/107826) .

La secuencia de miR-122 está bien conservada entre diferentes especies de mamíferos (mirbase, Sanger Center, R.U.) .

>hsa-miR-122 MIMAT0000421

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>mmu-miR-122 MIMAT0000246

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>mo-miR-122 MIMAT0000827

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>dre-miR-122 MIMAT0001818

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>xtr-miR-122 MIMAT0003585

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>gga-miR-122 MIMAT0001190

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>bta-miR-122 MIMAT0003849

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Joplin et al. también muestran que el bloqueo de miR-122 mediante un oligonucleótido inhibe la replicación 65 genómica de VHC. miR-122 interacciona con secuencias diana en 5’UTR y 3’UTR del virus, mutaciones en estos sitios reducen la replicación del virus. Los sitios diana de miR-122 tanto 5’UTR como 3’UTR están conservados en los genotipos de VHC 1a, 1b, 2, 3, 4, 5 y 6. Esto sugiere que la replicación de todos los genotipos de VHC puede reducirse bloqueando miR-122. Recientemente también se ha mostrado que la replicación del genotipo 2 se bloquea seleccionando como diana miR-122 con un oligonucleótido complementario (Randall et al. PNAS 2007) .

Un segundo factor celular de importancia para la capacidad de VHC de replicarse en células de mamífero es la ruta de ensamblaje de VLDL (Huang et al. 2007) . El ensamblaje de VLDL es importante para el empaquetamiento/liberación de las partículas virales a partir de la célula huésped. Reducir el ensamblaje de VLDL también reduce la liberación de partículas de VHC.

Un factor de particular importancia en la ruta de ensamblaje de VLDL es la apolipoproteína B (también conocida como ApoB, apolipoproteína B-100; ApoB-100, apolipoproteína B-48; ApoB-48 y antígeno Ag (x) ) . ApoB es una glicoproteína grande que realiza un papel indispensable en el ensamblaje y la secreción de lípidos y en el transporte y la captación y suministro mediados por receptor de distintas clases de lipoproteínas. ApoB desempeña un papel importante en la regulación de los niveles de lipoproteínas circulantes y por tanto es relevante en cuanto a la propensión a aterosclerosis que está altamente correlacionada con la concentración ambiental de lipoproteínas que contienen apolipoproteína B. Véase Davidson y Shelness (Annul Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193) para más detalles sobre las dos formas de ApoB presentes en mamíferos, su estructura y la importancia medicinal de ApoB.

El documento WO 2007/027775 reivindica el uso de oligonucleótidos anti-miR-122 para el tratamiento de enfermedades metabólicas o cardiovasculares.

En los mamíferos existen dos formas de apolipoproteína B. ApoB-100 representa la proteína de longitud completa que contiene 4536 residuos de aminoácido sintetizada exclusivamente en el hígado humano (Davidson y Shelness, Annul Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193) . Una forma truncada conocida como ApoB-48 es colineal con los 2152 residuos amino-terminales y se sintetiza en el intestino delgado de todos los mamíferos (Davidson y Shelness, Annul Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193) .

La base mediante la cual el gen estructural común de la apolipoproteína B produce dos isoformas de proteína distintas es un proceso conocido como edición del ARN. Una reacción de edición de citosina a uracilo específica del sitio produce un codón de terminación UAA y la terminación traduccional de apolipoproteína B para producir ApoB48 (Davidson y Shelness, Annul Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193) .

Aproximadamente el 70 % de todos los infectados establecen infección crónica. La terapia antiviral actual contra VHC consiste en interferón en combinación con ribavirina, que es eficaz en algunos pacientes, sin embargo un gran grupo no responden o no toleran el tratamiento. Por tanto, existe una necesidad de modalidades de tratamiento novedosas para VHC. La presente invención proporciona un tratamiento de combinación novedoso para VHC, que comprende un inhibidor de miR-122 en combinación con un inhibidor de ApoB-100 o un inhibidor de la ruta de ensamblaje de VLDL. El tratamiento de combinación proporcionado conduce a una reducción de dos factores de huésped endógenos, miR-122 y la ruta de VLDL (o APOB-100) , que se necesitan para la replicación completa de VHC. La implementación de un tratamiento que no selecciona directamente como diana el virus, sino que en vez de eso inhibe factores de huésped que son importantes para la replicación de VHC en la célula huésped, reducirá el problema relacionado con la alta tasa de mutación de un virus replicante de ARN/ARN, lo que podría aumentar la probabilidad de mutaciones de escape y resistencia a terapias que seleccionan directamente como diana el virus.

La invención se refiere a la combinación de compuestos que modulan (de manera adecuada inhiben) el ensamblaje de VLDL y compuestos que inhiben la función de miR-122, y a que usando ambos compuestos en la prevención o el tratamiento médico de infección por VHC se logra un tratamiento mejorado. Sin desear limitarse a ninguna teoría específica, se considera que combatir el virus en dos etapas diferentes de su ciclo vital conduce a una sinergia en la inhibición y a menor resistencia a fármacos.

Sumario de la invención La presente invención proporciona un tratamiento de combinación novedoso para infección por virus de la hepatitis C, usando los efectos combinados de bloquear miR-122 y VLDL/apoB.

La composición consiste en un inhibidor oligonucleotídico de miR-122 que consiste en la secuencia 5’-CcAttGTcaCaCtCC- 3’, y en el que las letras minúsculas representan ADN, las letras mayúsculas representan ANB y todas las C de ANB son 5’-metil-citosina y todos los enlaces internucleosídicos son enlaces fosforotioato en combinación con cualquier agente adicional de ensamblaje de VLDL según la reivindicación 1 (tal como un oligonucleótido antisentido de ANB que reduce ApoB100 o ARNip que bloquea ApoB100 u otros fármacos actuales que reducen la ruta/ensamblaje de VLDL, por ejemplo inhibidores de MTP (proteína de transferencia de triglicéridos microsomial) (tales como BMS-2101038 usado por Huang et al. 2007) o cualquier otro agente que reduce/bloquea la ruta/ensamblaje de VLDL) . También es posible que esto pueda combinarse con agentes antivirales adicionales.

En una realización, la presente invención usa oligonucleótido antisentido, tal como compuestos oligoméricos de ácido nucleico bloqueado (ANB) , para modular el ensamblaje de VLDL, por... [Seguir leyendo]

1. Inhibidor de mir-122 para el tratamiento de infección por virus de la hepatitis C (VHC) o hiperlipidemia o hipercolesterolemia o para la prevención o el tratamiento de aterosclerosis, en el que dicho inhibidor de miR-122 es un oligonucleótido antisentido de secuencia 5’-CcAttGTcaCaCtCC-3’, y en el que las letras minúsculas representan ADN, las letras mayúsculas representan ANB y todas las C de ANB son 5’-metil-citosina y todos los enlaces internucleosídicos son enlaces fosforotioato, y en el que el inhibidor de miR-122 debe usarse en combinación con un inhibidor adicional de ensamblaje de VLDL que es o bien un compuesto oligomérico antisentido que comprende una secuencia de nucleobases que es complementaria a una región correspondiente del ARNm de apoB-100 o un compuesto hipocolesterolemiante seleccionado del grupo que consiste en resinas secuestradoras de sales biliares (por ejemplo, colestiramina, colestipol y clorhidrato de colesevelam) , inhibidores de HMGCoA reductasa (por ejemplo, lovastatina, cerivastatina, prevastatina, atorvastatina, simvastatina y fluvastatina) , ácido nicotínico, derivados de ácido fíbrico (por ejemplo, clofibrato, gemfibrozilo, fenofibrato, bezafibrato y ciprofibrato) , probucol, neomicina, dextrotiroxina, ésteres de estanoles vegetales, inhibidores de la absorción de colesterol (por ejemplo, ezetimiba) , implitapida, inhibidores de transportadores de ácidos biliares (transportadores de ácidos biliares dependientes de sodio apicales) , reguladores de CYP7a hepática, agentes terapéuticos de sustitución de estrógeno (por ejemplo, tamoxifeno) , antiinflamatorios (por ejemplo, glucocorticoides) y estatinas.

2. Inhibidor de miR-122 según la reivindicación 1, en el que el inhibidor adicional de ensamblaje de VLDL es una estatina.

3. Inhibidor de miR-122 según la reivindicación 2, en el que la estatina se selecciona del grupo que consiste en lovastatina, cerivastatina, prevastatina, atorvastatina, simvastatina y fluvastatina.

4. Inhibidor de miR-122 según la reivindicación 2, en el que la estatina es fluvastatina.

5. Inhibidor de miR-122 según la reivindicación 1, en el que el inhibidor de ensamblaje de VLDL es un compuesto oligomérico antisentido que comprende una secuencia de nucleobases que es complementaria a una región correspondiente del ARNm de apoB-100.

6. Inhibidor de miR-122 según la reivindicación 5, en el que el compuesto oligomérico antisentido tiene una longitud de entre 10 y 23 nucleobases, tal como 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 ó 23 nucleobases.

7. Inhibidor de miR-122 según la reivindicación 5 ó 6, en el que el compuesto oligomérico antisentido que inhibe el ensamblaje de VLDL es un oligonucleótido gápmero que consiste en, o comprende, una secuencia de nucleobases de fórmula 5’ A - B - C 3’ u, opcionalmente, 5’ A-B-C-D 3’, en la que: la región A consiste en, o comprende, entre 1 y 5 análogos de nucleótido; la región B comprende 7, 8, 9, 10, 11 ó 12 nucleobases que, cuando se forman en un dúplex con un ARNm complementario, pueden reclutar ARNasaH, tal como unidad de nucleótido de ADN; la región C consiste en, o comprende, entre 1 y 5 análogos de nucleótido; y cuando está presente, la región D consiste en 1, 2 ó 3 unidades de ADN.

8. Inhibidor de miR-122 según la reivindicación 7, en el que los análogos de nucleótido presentes en las regiones A y C se seleccionan independientemente del grupo que consiste en 2’-O-alquil-unidad de ARN, 2’-OMe-unidad de ARN, 2’-amino-unidad de ADN, 2’- fluoro-unidad de ADN, unidad de ANB, unidad de ANP, unidad de ANH y unidad de ANI.

9. Inhibidor de miR-122 según la reivindicación 7, en el que los análogos de nucleótido presentes en las regiones A y C son todos unidades de ANB.

10. Inhibidor de miR-122 según la reivindicación 5, en el que el inhibidor de ensamblaje de VLDL se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 26 y SEQ ID NO: 103.

11. Inhibidor de miR-122 según una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en el que el inhibidor de miR-122 y el inhibidor de ensamblaje de VLDL se preparan para el tratamiento de pacientes que pueden ser, o son, resistentes a un tratamiento existente, tal como tratamiento con interferón y/o ribavirina.

12. Inhibidor de miR-122 según una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en el que el inhibidor de miR-122 y el inhibidor de ensamblaje de VLDL se preparan para el tratamiento o la prevención de infección por VHC.

13. Inhibidor de miR-122 según la reivindicación 12, en el que el inhibidor adicional de ensamblaje de VLDL es un compuesto oligomérico antisentido que comprende una secuencia de nucleobases que es complementaria a una región correspondiente del ARNm de apoB-100.

14. Inhibidor de miR-122 según la reivindicación 12, en el que el inhibidor adicional de ensamblaje de VLDL es una estatina.

15. Inhibidor de miR-122 según una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que el inhibidor de miR-122 y el inhibidor de ensamblaje de VLDL se preparan para la prevención de reinfección postrasplante en pacientes con VHC.