Anticuerpo neutralizante anti-GP88, o fragmento de unión al antígeno del mismo,

o polinucleótido antisentido de GP88, en combinación con una terapia antiestrogénica, para su utilización en el tratamiento del cáncer de mama en pacientes que presentan un tumor resistente a la terapia antiestrogénica

Antecedentes de la invención

La proliferación y la diferenciación de las células en los organismos pluricelulares están sujetas a un proceso muy regulado. Una característica distintiva de las células cancerosas es la ausencia de control sobre este proceso; la proliferación y la diferenciación se desregulan, provocando un crecimiento incontrolado. Se han realizado importantes esfuerzos investigadores para mejorar la comprensión de esta diferencia entre las células normales y las células tumorales. Un área de investigación se centra en los factores de crecimiento y, más concretamente, en la estimulación autocrina del crecimiento.

Los factores de crecimiento son polipéptidos portadores de mensajes a las células sobre el crecimiento, la diferenciación, la migración y la expresión génica. Por lo general, los factores de crecimiento se producen en una célula y actúan sobre otra distinta estimulando la proliferación. Sin embargo, algunas células malignas, en cultivo, presentan una dependencia mayor o absoluta de un mecanismo autocrino de crecimiento. Las células malignas que siguen este comportamiento autocrino eluden la regulación de la producción del factor de crecimiento por otras células y, por lo tanto, no están reguladas en su crecimiento.

El estudio del control autocrino del crecimiento facilita la comprensión de los mecanismos de crecimiento celular y da lugar a importantes avances en el diagnóstico y el tratamiento del cáncer. Con este fin, se han estudiado una serie de factores de crecimiento, incluidos los factores de crecimiento similares a la insulina (“IGF1” e “IGF2”), el péptido liberador de gastrina (“GRP”), los factores de crecimiento alfa y beta transformantes (“TGF-a” y “TGF-b”) y el factor de crecimiento epidérmico (“EGF”).

La presente invención se refiere a un factor de crecimiento descubierto recientemente. Dicho factor de crecimiento fue descubierto por primera vez en el medio de cultivo de “células PC” altamente oncógeno, una variante independiente de la insulina aislada a partir de la línea celular adipógena 1246 derivada de teratoma. Se hace referencia a este factor de crecimiento como “GP88” en la presente memoria. El GP88 se ha purificado y caracterizado estructuralmente. La secuenciación de aminoácidos del GP88 indica que el GP88 presenta similitudes en la secuencia de aminoácidos con el precursor de granulina/epitelina de ratón.

Las granulinas/epitelinas (“grn/epi”) son polipéptidos de 6 kDa y pertenecen a una nueva familia de polipéptidos ricos en cisteína doble. La patente US nº 5.416.192 (Shoyab et al.) se refiere a epitelinas de 6 kDa, particularmente epitelina 1 y epitelina 2. Según Shoyab, las dos epitelinas están codificadas por un precursor común de 63,5 kDa, que se procesa en formas menores en cuanto se sintetiza, de tal modo que los únicos productos naturales que se encuentran en las muestras biológicas son las formas de 6 kDa. Shoyab et al. dan a conocer que el precursor de la epitelina es biológicamente inactivo.

Contrariamente a las tesis de Shoyab et al., el laboratorio de los presentes inventores ha demostrado que el precursor no siempre se procesa en cuanto se sintetiza. Los estudios, realizados en parte por el presente inventor, han demostrado que, en realidad, el precursor (es decir, el GP88) se secreta como una glicoproteína de 88 kDa con un resto de hidrato de carbono enlazado a N de 20 kDa. El análisis de la secuencia N-terminal del GP88 indica que el GP88 se inicia en el aminoácido 17 del precursor de grn/epi, lo que demuestra que los primeros 17 aminoácidos de la secuencia proteínica deducida a partir del ADNc del precursor corresponden a un péptido señal compatible con el direccionamiento para localización de la membrana o para secreción. Contrariamente a las tesis de Shoyab et al., el GP88 es biológicamente activo y tiene una actividad promotora del crecimiento, particularmente como un factor de crecimiento autocrino para las células productoras.

El documento WO98/52607 identifica el GP88 como un factor de crecimiento oncógeno.

Lu et al. (PNAS (2001) 98:142-147) han demostrado que el GP88 modifica los efectos mitógenos de los estrógenos en las células MCF-7.

El cáncer de mama es una causa importante de morbilidad y mortalidad entre las mujeres en todo el mundo. Es conocido que los estrógenos son un estimulador importante del crecimiento celular en el cáncer de mama humano positivo para receptores de estrógeno (ER+) in vivo e in vitro. Aunque inicialmente los estrógenos son necesarios para el establecimiento y la proliferación de los tumores de mama, el desarrollo de tumores independientes a los estrógenos durante el curso del cáncer de mama es indicativo de mal pronóstico. Se ha postulado que el efecto mitógeno de los estrógenos en las células de cáncer de mama está mediado, por lo menos parcialmente, por factores de crecimiento autocrinos, incluidos factores de crecimiento regulados por estrógenos. Por lo tanto, la identificación y caracterización de los genes sensibles a los estrógenos, particularmente los genes que codifican los factores de crecimiento, contribuye a la comprensión de los efectos de los estrógenos en las células de cáncer de mama.

El citrato de tamoxifeno (“tamoxifeno”) es un antiestrógeno no esteroide recetado habitualmente a los pacientes que sufren un cáncer de mama que ha demostrado potentes propiedades antiestrogénicas y antineoplásicas, tal como se detalla en la patente US nº 4.536.516. El tamoxifeno es un antagonista de los receptores de estrógeno que compite con el estrógeno para enlazarse a los receptores de estrógeno. Otros antiestrógenos incluyen raloxifeno, inhibidores de la aromatasa (por ejemplo, Arimidex® (anastrozol), Femera®), y los reguladores de disminución de los receptores de estrógeno (por ejemplo, Faslodex®). Los efectos antiestrogénicos del tamoxifeno pueden estar relacionados con su capacidad para competir con los estrógenos por los sitios de unión en los tejidos diana. Otros antiestrógenos, como los inhibidores de la aromatasa, inhiben o reducen la cantidad de estrógenos disponibles. Por ejemplo, los inhibidores de la aromatasa impiden la conversión de los andrógenos en estrógenos, con lo que se reduce la cantidad de estrógenos disponibles. Los reguladores de disminución de los receptores de estrógenos inhiben o reducen el número de receptores de estrógenos en la célula.

Actualmente, el tamoxifeno está disponible en comprimidos de 10 y 20 mg a través de los laboratorios AstraZeneca y Barr con el nombre comercial Nolvadex®, y está indicado para el cáncer de mama metastásico, la terapia adyuvante del cáncer de mama, el carcinoma ductal in situ y la reducción de la incidencia de cáncer de mama en mujeres con riesgo elevado de padecer cáncer de mama. Así, el tamoxifeno se puede utilizar para tratar y prevenir diversos tipos de cáncer, y particularmente el cáncer de mama.

Sin embargo, la administración de tamoxifeno conlleva riesgos potencialmente graves para el paciente. Por ejemplo, la administración de tamoxifeno se ha asociado con un mayor riesgo de cáncer de ovario. Además, algunos pacientes muestran resistencia a los efectos previsiblemente beneficiosos del tamoxifeno. Por lo tanto, la administración de tamoxifeno a un paciente resistente a sus beneficios provoca daños innecesarios en el mismo, aumentando el riesgo de que padezca cáncer de ovario y, al mismo tiempo, retrasando u obligándole a renunciar a tratamientos más eficaces.

En consecuencia, la administración de tamoxifeno se debe limitar a los pacientes que presentan más probabilidades de beneficiarse del tratamiento con el mismo. La determinación precisa de si un paciente va a ser susceptible o resistente a los efectos antineoplásicos de la administración de tamoxifeno antes de iniciar dicho tratamiento puede constituir una valiosa herramienta de diagnóstico.

En la actualidad, la técnica nos muestra que la ausencia de receptores de estrógenos en un paciente se corresponde con la resistencia al tamoxifeno. Los pacientes de cáncer son sometidos rutinariamente a pruebas con el fin de detectar la presencia o ausencia de receptores de estrógenos para tratar de predecir si el paciente va a ser resistente o sensible a la terapia con tamoxifeno. Sobre la base de dichas pruebas, a los pacientes de cáncer que dan positivo a la presencia de receptores de estrógenos (“ER+” o “pacientes positivos para receptores de estrógenos”)... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo neutralizante anti-GP88, o fragmento de unión al antígeno del mismo, o polinucleótido antisentido de

GP88, en combinación con una terapia antiestrogénica, para su utilización en el tratamiento del cáncer de mama en 5 pacientes que presentan un tumor resistente a la terapia antiestrogénica.

2. Anticuerpo neutralizante anti-GP88, o fragmento de unión al antígeno del mismo, en combinación con una terapia antiestrogénica, para su utilización en el tratamiento del cáncer de mama en pacientes que presentan un tumor resistente a la terapia antiestrogénica según la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo o fragmento está

10 humanizado o quimerizado.

3. Anticuerpo neutralizante anti-GP88, o fragmento de unión al antígeno del mismo, en combinación con una terapia antiestrogénica, para su utilización en el tratamiento del cáncer de mama en pacientes que presentan un tumor resistente a la terapia antiestrogénica según la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho anticuerpo o fragmento es

15 monoclonal.

4. Anticuerpo neutralizante anti-GP88, o fragmento de unión al antígeno del mismo, o polinucleótido antisentido de GP88, en combinación con una terapia antiestrogénica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho tumor de cáncer de mama es un tumor de cáncer de mama positivo para receptores de estrógeno.

5. Anticuerpo neutralizante anti-GP88, o fragmento de unión al antígeno del mismo, o polinucleótido antisentido de GP88, en combinación con una terapia antiestrogénica, según la reivindicación 4, en el que dicha terapia antiestrogénica se selecciona de entre el grupo constituido por tamoxifeno, raloxifeno e inhibidores de la aromatasa.