Un procedimiento de uso en el diagnóstico de apendicitis en un paciente del que se sospecha que tiene apendicitis que comprende probar la presencia de MRP-8/14,

a un nivel diagnóstico de apendicitis, en una muestra de sangre completa, plasma o suero obtenido del paciente

Referencia cruzada a las solicitudes relacionadas

La presente solicitud reivindica prioridad respecto de la solicitud provisional de EE.UU. nº de serie 60/590631 presentada el 23 de julio de 2004.

Antecedentes de la invención

La apendicitis es un problema quirúrgico agudo común que afecta a los seres humanos de un amplio intervalo de edad. Anualmente hay aproximadamente 700.000 casos en los Estados Unidos. Una gran proporción de casos se produce en el grupo de 10 a 30 años. Un diagnóstico preciso en una fase suficientemente temprana es un factor significativo para lograr un resultado satisfactorio.

Muchas personas se presentan a su médico con síntomas que sugieren apendicitis, pero producidos por otras enfermedades tales como infecciones víricas. Diferenciar los pacientes con apendicitis de aquellos afectados por otras enfermedades es una desalentadora tarea clínica que afrontan diariamente los médicos. Aunque la ciencia médica tiene un excelente entendimiento de la apendicitis y su tratamiento, está muy limitada en su capacidad para reconocer o diagnosticar con exactitud la enfermedad.

El objetivo de un diagnóstico preciso y temprano se complica por el considerable solapamiento de apendicitis verdadera con otros estados clínicos. Parece que no hay signo individual, síntoma, prueba o procedimiento que pueda proporcionar una indicación fidedigna de apendicitis. La tecnología de obtención de imágenes es inadecuada en la identificación y la caracterización del apéndice, especialmente en las fases tempranas de la enfermedad cuando es probable que el tratamiento sea más eficaz. La tecnología de obtención de imágenes es además desventajosa por sus gastos y su dependencia de la disponibilidad de personal altamente cualificado y experimentado para interpretar los estudios. Esta limitación afecta a miles de personas cada año por el diagnóstico incorrecto de su problema o por el retraso del diagnóstico exacto. En casos de apendicitis, los retrasos en el diagnóstico son el único factor más importante que conduce al empeoramiento de la afección y a más complicaciones relacionadas con la enfermedad. El diagnóstico erróneo de apendicitis puede conducir no sólo a cirugía innecesaria, sino también a retrasar la apropiada terapia para la afección subyacente real.

Un dilema para los cirujanos es cómo minimizar la tasa de apendicectomías negativas sin aumentar la incidencia de perforación entre pacientes que pensaban que podían tener apendicitis. Lo que se necesita urgentemente para tratar más eficazmente esta enfermedad muy común es una prueba de diagnóstico fidedigno simple que pueda reconocer las fases más tempranas del proceso de enfermedad.

La patogénesis típica en la apendicitis empieza con la obstrucción de la luz, aunque una inflamación inicial del órgano puede preceder e incluso contribuir a la obstrucción. La mucosidad secretada del apéndice llena la luz cerrada, produciendo un aumento en la presión intralumenal y la distensión. El aumento de la presión intralumenal puede superar el nivel de presión de perfusión capilar, produciendo la perturbación del drenaje linfático y circulatorio normal. Por último lugar, el apéndice puede volverse isquémico. La mucosa del apéndice está comprometida, que puede permitir la invasión de bacterias intralumenales. En casos avanzados, la perforación del apéndice también puede producirse con derrame de pus en la cavidad peritoneal.

Actualmente, el diagnóstico de apendicitis es difícil, y la dificultad persiste durante diversas fases en la progresión de la afección. Lo siguiente representa una representación hipotética de fases y presentaciones clínicas asociadas. Los expertos en la materia reconocerán que se producirá un grado de variación considerable en una población de pacientes dada.

En las fases más tempranas de inflamación un paciente puede presentar una variedad de signos y síntomas no específicos. Tras la obstrucción, la presentación puede implicar dolor periumbilical, ligeros calambres y pérdida del apetito. El progreso hacia el aumento de la presión lumenal y la distensión puede asociarse a la presentación que implica la localización de dolor en el cuadrante inferior derecho del abdomen, náuseas, vómitos, diarrea y febrícula. Si se produce la perforación, un paciente puede presentar dolor intenso y fiebre alta. En este estado muy avanzado la sepsis puede ser un riesgo grave con un resultado posiblemente mortal.

Los médicos usan actualmente varias herramientas para ayudar en el diagnóstico de apendicitis. Estas herramientas incluyen examen físico, pruebas de laboratorio y otros procedimientos. Las pruebas de laboratorio rutinarias incluyen hemograma completo (CBC) con o sin diferencial y análisis de orina (UA). Otras pruebas incluyen un barrido por tomografía computarizada (CT) del abdomen y ultrasonografía abdominal. Los procedimientos pueden incluir, por ejemplo, examen laparoscópico y cirugía exploradora.

Flum y col. intentaron determinar si la frecuencia de diagnóstico erróneo que precedía a la apendicectomía había disminuido al aumentar la disponibilidad de ciertas técnicas (Flum DR y col., 2001). Estas técnicas incluyeron tomografía computarizada (CT), ultrasonografía y laparoscopia, que se han sugerido para pacientes que presentan signos ambiguos de apendicitis. Flum y col. concluyeron del siguiente modo: “Contrario a lo esperado, la frecuencia de diagnóstico erróneo que conduce a apendicectomía innecesaria no ha cambiado con la introducción de la tomografía computarizada, la ultrasonografía y la laparoscopia, ni ha disminuido la frecuencia de perforación. Estos datos sugieren que en un nivel de población el diagnóstico de apendicitis no ha mejorado con la disponibilidad de pruebas de diagnóstico avanzadas”. La tasa de diagnóstico erróneo de apendicitis es aproximadamente el 9 por ciento en hombres y aproximadamente 23,2 por ciento en mujeres (Neary, W., 2001).

El complejo de proteína relacionada con mieloide 8/14 (MRP-8/14) es un complejo heterodimérico asociado a afecciones inflamatorias agudas (para una revisión véase Striz y Trebichavsky, 2004). El complejo pertenece a la superfamilia S100 de proteínas y también está relacionado con S100A8/9, L1, la proteína relacionada con el factor inhibidor de macrófagos y calprotectina. El heterodímero consiste en una subunidad de 8 kilodalton (MRP-8) y 14 kilodalton (MRP-14). MRP-8 y MRP-14 se llaman alternativamente S100A8/calgranulina y S100A9/calgranulina b, respectivamente. MRP-8/14 es una proteína de unión a calcio descubierta originalmente en macrófagos. Los neutrófilos que expresan altas concentraciones de MRP-8/14 se encuentran en una variedad de afecciones inflamatorias que incluyen artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino y rechazo de aloinjertos (Frosch y col., 2000; Limburg y col., 2000; Burkhardt y col., 2001).

El MRP-8/14 no siempre es diagnóstico de inflamación. Por ejemplo, no indica de forma fidedigna la presencia de divertículos inflamatorios (Gasché, C. 2005). Los linfocitos no contienen generalmente MRP-8/14 (Hycult Biotechnology, Monoclonal Antibody to Human S100A8/A9) y, por tanto, el MRP-8/14 no es diagnóstico de inflamación caracterizada por la presencia de linfocitos, pero no neutrófilos. Por tanto, esta proteína no siempre está asociada a infecciones oportunistas (Froland, M.F. y col., 1994).

La haptoglobina es una proteína de fase aguda que se une a hemoglobina libre tras la hemolisis. El complejo haptoglobina-hemoglobina se elimina por el hígado. La haptoglobina es un heterotetrámero compuesto por dos subunidades alfa y dos beta. Las unidades alfa y beta se derivan de un único precursor de la cadena de polipéptidos que se escinde enzimáticamente para producir las subunidades. Los pesos moleculares de las subunidades son aproximadamente 9 kd-18 kd y 38 kd para alfa y beta, respectivamente.

Además de ser un eliminador de hemoglobina, la haptoglobina tiene una amplia gama de funciones biológicas (Dobryszycka, 1997). Se ha mostrado que la haptoglobina se regula por incremento y modula la respuesta inmunitaria en ciertas afecciones de infección e inflamatorias regulando quizás la función de monocitos (Arredouani y col., 2005). Se ha demostrado que la subunidad alfa es un marcador de suero posiblemente útil para cáncer de ovario (Ye y col., 2003).

La capacidad para diagnosticar con exactitud apendicitis se aumentaría enormemente por la identificación de moléculas diferencialmente asociadas a apendicitis.

Resumen de... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de uso en el diagnóstico de apendicitis en un paciente del que se sospecha que tiene apendicitis que comprende probar la presencia de MRP-8/14, a un nivel diagnóstico de apendicitis, en una muestra de sangre completa, plasma o suero obtenido del paciente.

2. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que dicho paciente presenta al menos un síntoma clásico de apendicitis seleccionado del grupo que consiste en: dolor en el abdomen; dolor que empieza cerca del ombligo, luego se mueve al cuadrante derecho inferior del abdomen; anorexia (pérdida del apetito); problemas de alimentación acompañados de somnolencia; náuseas que empiezan después de la aparición de dolor; vómitos que empiezan después de la aparición de dolor; vómitos acompañados de fatiga; estreñimiento; heces pequeñas con mucosidad; diarrea; incapacidad para eliminar los gases; febrícula; distensión abdominal; dolor en el abdomen que empeora; tenesmo; fiebre alta; leucocitosis; y aumento de la viscosidad del plasma.

3. Un procedimiento según la reivindicación 2, en el que dicho paciente presenta dos o más de dichos síntomas clásicos de apendicitis.

4. Un procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 realizado en un dispositivo de ensayo inmunológico.

5. Un procedimiento según cualquier reivindicación precedente, en el que no se sabe que el paciente tiene una afección interferente asociada a la presencia de MRP-8/14 en una muestra del tipo en el que se prueba MRP-8/14, en el que dicha afección interferente se selecciona del grupo que consiste en aloinjerto reciente; septicemia; meningitis; neumonía; tuberculosis; artritis reumatoide; cáncer gastrointestinal; enfermedad inflamatoria del intestino; cáncer de piel, periodontitis, preeclampsia y SIDA.

6. Un procedimiento según cualquier reivindicación precedente, en el que se prueba un nivel de MRP-8/14 superior a aproximadamente 10 µg/ml de MRP-8/14 que es diagnóstico de apendicitis.

7. Un procedimiento según cualquier reivindicación precedente, en el que se prueba un nivel de MRP-8/14 superior a aproximadamente 11 µg/ml de MRP-8/14.

8. Un procedimiento según cualquier reivindicación precedente, en el que se prueba un nivel de MRP-8/14 superior a aproximadamente 15 µg/ml de MRP-8/14.

9. Un procedimiento según cualquier reivindicación precedente, en el que un nivel de MRP-8/14 superior a aproximadamente 20 µg/ml de MRP-8/14 es diagnóstico de apendicitis.

10. Un procedimiento según cualquier reivindicación precedente, en el que se prueba al menos una molécula adicional diferencialmente asociada a apendicitis, en el que dicha al menos una molécula adicional se selecciona del grupo que consiste en: inhibidor 1 del activador de plasminógeno, proteínas de unión a ácidos grasos, factor kappa beta nuclear (NFκB), ácidos nucleicos que codifican cualquiera de los anteriores, y haptoglobina.

11. Un procedimiento según la reivindicación 10, en el que se prueba un nivel de haptoglobina superior a 139 mg/dl.

12. Un procedimiento según la reivindicación 10, en el que se prueba un nivel de haptoglobina superior a 150 mg/dl.

13. Un procedimiento según cualquier reivindicación precedente, en el que dicho MRP-8/14 y dicha al menos una molécula adicional se prueban probando la presencia de una secuencia de ácidos nucleicos que codifica dicho MRP8/14 o dicha al menos una molécula adicional en dicha muestra.

14. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que dicho MRP-8/14 se prueba para usar el anticuerpo 27e10.