NANOCAPSULAS DE OXOISOAPORFINAS PARA EL TRATAMIENTO DE LA DEPRESION.

Nanocápsulas de oxoisoaporfinas para el tratamiento de la depresión.

Se describen sistemas nanocapsulares que incorporan compuestos de fórmulas I ó II que permiten la liberación controlada en el tiempo de dichos compuestos. También se describen el procedimiento de obtención, las composiciones farmacéuticas y el uso para la preparación de un medicamento.

NANOCÁPSULAS DE OXOISOAPORFINAS PARA EL TRATAMIENTO DE LA DEPRESIÓN

Sector de la técnica La presente invención se refiere a nanocápsulas de compuestos de fórmula I o 11 y a composiciones farmacéuticas que comprenden esas nanocápsulas.

Antecedentes Un grupo de compuestos derivados de oxoisoaporfinas de fórmula I y 11, resultaron ser selectivos y potentes inhibidores de la monoamino oxidasa A (MAO-A) en rangos de valores de ICso de nM a pM en ensayos realizados in vitro (Eduardo Sobarzo-Sánchez, Matilde Yañez Jato, Francisco Orallo Cambeiro, Eugenio Uriarte Villares y Ernesto Cano Rubio, "Use of oxoisoaporphines and their derivatives thereof as selective inhibitors ofmonoamino oxidase A", 2008, W0I2009/034216) . Pero es necesario tener en cuenta que el SNC está protegido por la barrera hematoencefálica (BHE) , un sistema de defensa homeostático diseñado para la protección contra patógenos y toxinas. La BHE es efectiva en prevenir la entrada de potenciales materiales dañinos regulando la entrada de solutos a través de las células endoteliales. Sin embargo, esto también limita la capacidad de acceso al SNC de compuestos terapéuticamente beneficiosos. Aunque es ampliamente conocido que las moléculas pequeñas pueden atravesar la BHE, su capacidad de acceso está condicionado por el tamaño « 400 Da) y por la lipofilicidad. Es necesario diseñar una formulación que permita que estos compuestos atraviesen la barrera hematoencefálica para que su administración sea la más adecuada.

Descripción de la invención Los autores de la presente invención han desarrollado sistemas nanoparticulares estables, con elevada eficacia de asociación de los compuestos de fórmulas I y 11, Y que permiten liberarlos de forma controlada en el tiempo. Por lo que, la presente invención aporta un sistema de nanocápsulas adecuado para incorporar los compuestos de fórmula I y 11, que presenta potencialidad para atravesar la barrera hematoencefálica. De este modo la invención proporciona además composiciones farmacéuticas selectivas y eficaces para la inhibición de MAO-A, y útiles en el tratamiento de la depresión.

llIi Así, en un aspecto la invención se dirige a un sistema de nanocápsulas caracterizadas por un tamaño medio inferior a 1 J.I1ll que comprende un polímero, un agente tensioactivo, un aceite y un compuesto seleccionado de entre los compuestos de fórmula 1 y 11, sus sales, hidratos, solvatos y N-óxidos,

donde: _R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, Y R9 son cada uno de ellos seleccionados de forma independiente entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloheteroalquilo, arilo, _ORb y_NR3Rb;

_Ra y Rb se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilo o, alquenilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, heteroarilo, o, Ra y Rb conjuntamente forman un anillo de heterociclo, de 4 a 7 miembros conteniendo 0-2 heteroátomos independientemente seleccionados entre oxígeno, azufre y N-Re, donde Re se selecciona entre hidrógeno, alquilo, y -C (O) Rb•

En otro aspecto la invención se dirige a una composición farmacéutica que comprende los sistemas de nano cápsulas descritos anteriormente. En otro aspecto la invención se dirige al uso de las compOSICIOnes farmacéuticas descritas anteriormente para la preparación de un medicamento. En una realización particular, el medicamento es para el tratamiento de desórdenes nerviosos.

En otro aspecto, la invención se refiere a un procedimiento para la preparación de los sistemas de la invención como se definieron anteriormente, que comprende:

a) preparar una fase orgánica que comprende un disolvente orgánico, un polímero, un aceite y un compuesto seleccionado de entre el grupo constituido por los compuestos de fórmula 1 y 11, sus sales, hidratos, solvatos y N-óxidos,

b) preparar una fase acuosa que comprende al menos un agente tensioactivo, c) mezclar las fases preparadas en las etapas a) y b) , y d) eliminar el disolvente.

Descripción de las figuras Figura 1. Esquema de las nanocápsulas poliméricas que contienen OXO compuestos:

A: polímero; B: fase oleaosa; C: nanocápsulas; D: oxoisoporfinas; E: Fase acuosa; F: Interacción de los Oxo compustos con la fase oleosa y la matriz de polímero. Figura 2. Cromatograma de OXO 1 obtenido bajo condiciones cromatográficas descritas. Figura 3A. Curva de calibración para el compuesto OXOl por CLAE. Ecuación de la recta: y = 0, 64x + 0, 176. Figura 38: Curva de calibración para el compuesto oxoisoaporphines-2 por CLAE. Ecuación de la recta: y = 4, 37x -0, 43; Figura 3C: Curva de calibración para el compuesto oxoisoaporphines-3 por CLAE. Ecuación de la recta: y = 0, 98x +0, 20; Figura 3D: Curva de calibración para el compuesto oxoisoaporphines-4 por CLAE. Ecuación de la recta: y = 3, 99x + 2, 44; Figura 3E: Curva de calibración para el compuesto oxoisoaporphines-5 por CLAE. Ecuación de la recta: y = 0, 95x + 0, 89; Figura 3F: Curva de calibración para el compuesto oxoisoaporphines-6 por CLAE. Ecuación de la recta: y = 0, 87x -3, 64. Figura 4. Esquema del sistema con el que se captaba el comportamiento de los animales. Figura 5. a) Vista de los vasos y ratones desde la posición de la cámara de vídeo y b) Representación del camino recorrido por los animales pinchados con vehículo (PCL) en el área correspondiente a los vasos. Figura 6. Tiempo de inmovilidad de los ratones tratados con la molécula libre OXO 4 a una dosis de lmglkg. n=8 para cada grupo. Los resultados se expresan en segundos como la media ± error estándar. Los asteriscos marcan los resultados estadísticamente significativos de acuerdo con un tratamiento ANOV A seguido de un test de Dunnet. *p<0, 05, **p<O, Ol. Figura 7. Tiempo de inmovilidad de los ratones tratados con la molécula PCL-OXO 4 (molécula nanoencapsulada) a una dosis de lmglkg. n=8 para cada grupo. Los resultados se expresan en segundos como la media ± error estándar. Los asteriscos marcan los resultados estadísticamente significativos de acuerdo con un tratamiento ANOVA seguido de un test de Dunnet. *p<0, 05, **p<O, OI. Figura 8. Tiempo de inmovilidad de los ratones tratados con la molécula libre OXO 3 a una dosis de 1 mglkg. n=8 para cada grupo. Los resultados se expresan en segundos como la media ± error estándar. Los asteriscos marcan los resultados estadísticamente significativos de acuerdo con un tratamiento ANOV A seguido de un test de Dunnet. *p<0, 05, **p<O, OI. Figura 9. Tiempo de inmovilidad de los ratones tratados con la molécula PCL-OXO 3 (molécula nanoencapsulada) a una dosis de lmg/kg. n=8 para cada grupo. Los resultados se expresan en segundos como la media ± error estándar. Los asteriscos marcan los resultados estadísticamente significativos de acuerdo con un tratamiento ANOVA seguido de un test de Dunnet. *p<0, 05, **p<O, OI.

Descripción detallada de la invención Los compuestos de fórmulas I y 11 ya mostraron una elevada selectividad en la inhibición de MAO-A frente a MAO-B y una actividad superior en comparación a principios activos como, por ejemplo, Clorgilina y Moc1ºbemida (W02009034216, tabla 1 página 23) . Estas ventajas los hacen excelentes candidatos en el tratamiento de desórdenes nerviosos como desórdenes bipolares, depresivos, pánico, etc. Los compuestos de fórmulas I y 11 pueden estar en forma de sales, como por ejemplo, la sal de amonio. Los compuestos I y 11 también pueden estar en forma oxidada, en cuyo caso son N-óxidos.

En una realización particular, en los compuestos de fórmula 1, R1 YR2 son cada uno de ellos seleccionados de forma independiente entre hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo, alquenilo, _ORb y_NRaRb; y R3, R\ R5, R6, R7, R8 Y R9 son cada uno de ellos seleccionados de forma independiente entre hidrógeno, halógeno, alquilo, cic1ºalquilo, alquenilo, cic1ºheteroalquilo, arilo, -ORb Y-NRaRb; donde Ra y Rb son como se definieron anteriormente.

En otra realización particular, en los compuestos de fórmula 1, R1 YR2 son hidrógeno y R3, R4, R5, R6, R7, R8 Y R9 son cada uno de ellos seleccionados de forma independiente entre hidrógeno, halógeno, y _ORb1 ; donde Rbl se selecciona entre hidrógeno y alquilo.

En otra realización particular, en los compuestos de fórmula 1, R1, R2, R3, R6, R7, R8 Y R9 son hidrógeno y R4 Y R5 se seleccionan independientemente entre hidrógeno, metilo o hidroxilo.

En una realización particular, en los compuestos de fórmula 1I, R1, R2, R3, R\ R5, R6, R7 R8 Y R9

, son cada uno de ellos seleccionados de forma independiente entre hidrógeno, halógeno, nitro, alquilo, cicloalquilo, arilo o _ORb; donde Rb es como se definió anteriormente.

En otra realización particular, en los compuestos de fórmula 1I, R1 Y R2 se seleccionan...

1. Sistema de nanocápsulas caracterizadas por un tamaño medio inferior a 1 Jlm que comprende un polímero, un agente tensioactivo, un aceite y un compuesto seleccionado de entre los compuestos de fórmula 1y n, sus sales, hidratos, solvatos y N-óxidos, R3 R2 R3 R2

R.t R1 R4 R1

R5 R5 Rg Rg

Rs Rs R7 R7

(1) (11)

donde:

_R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, Y R9 son cada uno de ellos seleccionados de forma independiente entre hidrógeno, alquilo, cic1ºalquilo, alquenilo, cic1ºheteroalquilo, arilo, _ORb y_NRaRb;

_Ra y Rb se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilo o, alquenilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, heteroarilo, o, Ra y R b conjuntamente forman un anillo de heterociclo, de 4 a 7 miembros conteniendo 0-2 heteroátomos independientemente seleccionados entre oxígeno, azufre y N_Rc, donde RC se selecciona entre hidrógeno, alquilo, y -C (O) Rb.

2. Sistema según la reivindicación 1 donde el compuesto se selecciona entre los compuestos: 2, 3-dihidro-7 H-dibenzo[ de, h]quinolin-7 -ona 7H-dibenzo[de, h]quinolin-7-ona

5. metoxi-2, 3-dihidro-7H-dibenzo[de, h]quinolin-7-ona 5-metoxi-7 H-dibenzo[ de, h]quinolin-7 -ona 5-metoxi-6-hidroxi-2, 3-dihidro-7 H-dibenzo[ de, h]quinolin-7-ona 5-metoxi-6-hidroxi-7 H-dibenzo[ de, h ]quinolin-7 -ona 3. Sistema según la reivindicación 1 y 2, donde el polímero se selecciona de entre de entre poliestireno, poliéster, polifosfazina, polietilenglicol, polivinil alcohol, poliacrilamida, poliacrilato, polivinil pirrolidinona, polialilamina, polietileno, ácido poliacrílico, polimetacrilato, polisiloxano, polioxietileno, celulosa, quitosano, polihidroxibutarato y sus derivados.

4. Sistema según la reivindicación 3, donde el polímero es poli-epsilon-caprolactona.

5. Sistema según la reivindicación 1, donde el aceite se selecciona de entre hidrocarburos alifáticos saturados y no saturados, hidrocarburos aromáticos, hidrocarburos cíclicos y acíclicos, triglicéridos de cadena carbonada C 1-C24 saturados

o no saturados.

6. Sistema según la reivindicación 1, donde el aceite se selecciona entre aceite de girasol, oliva, soja, palma y colza.

7. Sistema según la reivindicación 1, donde el agente tensioactivo se selecciona entre etoxi1ato de aceite de castor, Pluronic F68 (copolímero de óxido de etileno y óxido de propileno) , BRIJ (estearato) , Tween 20 (polisorbato 20) , Tween 40 (polisorbato 40) , Tween 60 (polisorbato 60) , Tween 80 (polisorbato 80) , lauril sulfato sódico, Crillet 1, Crillet 4 HP, Crillet 4 NF, Cremophor RH40, Cremophor RH60, Cremophor EL, Etocas 30, Mkkol HCO-60, Labrasol, Acconon MC-8, Gelucire 50/13, Gelucire 44/14, MYRJ, polioxameros, Epikuron 170, fosfolípidos, Span (monoestearato de sorbitan) , glicerol monoestearato, Capmul MCM (caprílico/caprico glicérido) , Capmul MCM 8, Capmul MCM 10, Imwitor 988, Imwitor 742, Imwitor 308, Labrafil M 1944 CS, Labrafil M 2125, Capr y ol PGMC, Capr y ol 90, Lauroglycol, Captex 200, ácido graso etoxilado, Plurol oleico (poligliceril-6-dioleato) , Crill 1 (laurato de sorbitan) , Crill 4 (oleato de sorbitan) , Maisine (monolinoleato de glicerina) , Peceol (gliceril oleato) y Arlacel P135 (polietilenglicol dipolihidroxiestearato) .

8. Procedimiento para la preparación de los sistemas, como se definieron en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende:

i) preparar una fase orgánica que comprende un disolvente orgánico, un polímero, un aceite y un compuesto seleccionado de entre el grupo constituido por los compuestos de fórmula 1 y n, como se definieron en la reivindicación 1, sus sales, hidratos, solvatos y N-óxidos,

j) preparar una fase acuosa que comprende al menos un agente tensioactivo, k) mezclar las fases preparadas en las etapas a) y b) , y 1) eliminar el disolvente.

nanocápsulas

nanocápsulas

A

\

~.B

e • D

o 0.5 1.5 2 25 3 ~5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 Tiempo (min)

FIGURA 2

« 20 15 10

O 10 20 30 40 50 60 Concentracion (~g/mL) 70 80 90

FIGURA3A

45 40 35 • •

- ;-30 :::) ~ 25 ro ~ « 20

15

10

2 3 4 5 6 7 8 Concentracion (llg/mL) 9 10 11

FIGURA3B

3 4 5 6 7 8 9 10 11 Concentracion (llg/mL)

FIGURA3C

40 35

-30

=>

oc: (

-

ro ~

e: (

10

•

I

3 4 5 6 7 8 9 10 11 Concentracion (llg/mL)

FIGURA 3D

Concenlracion (llg/mL)

FIGURA3F

....

~-."..".

-

FIGURA 4

FIGURA5a FIGURA Sb

...~ 240 O 220

« 200 ~ 180 > 160 O 140 ~ 120 z 100 w 80 O 60

~ 40 ~ 20

~ O

-

~ 240 O 220 « 200

O

::J

>

O 140 ~ 120

z

100 w 80

O

O

o...

~ 20

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....

CMCNa + OX04 (1 mg/kg)

*

**

• **

FIGURA 6

PCL-OX04 (1 mg/kg)

*

**

...........

...........

...........

...........

...........

...........

...........

•··········1

...........

...........

...........

...........

FIGURA 7

CMCNa + OX03 (1mg/kg)

ro--240 O 220 ~ 200 ~ 180 > 160 O 140 ::iE 120 z 100 w 80

O 60 ~ 40 ::iE 20

~ O

FIGURAS

PCL-OX03 (1 mg/kg)

-

!e 240 O 220 ~ 200

-l 180

>

O 140 ~ 120 100 w 80

O • *

O

o.. 40

z w O T [1

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FIGURA 9