Una proteína formadora de poros modificada para utilizarla en el tratamiento de la hiperplasia prostática benigna (HPB),

obteniendo dicha proteína formadora de poros modificada de una proteína de proaerolisina formadora de poros naturalmente presente y que comprende una o más modificaciones selectivas para la próstata seleccionadas de una secuencia de activación clivable por una proteasa específica para la próstata, y uno o más dominios diana específicos para la próstata capaces de dirigirse selectivamente a las células prostáticas, donde dicha proteína formadora de poros modificada es capaz de matar selectivamente las células prostáticas.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere al campo de la hipertrofia prostática benigna y, en particular, al uso de proteínas formadoras de poros modificadas para el tratamiento de la hiperplasia prostática benigna (HPB).

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Se han descrito muchas proteínas citolíticas (Lesieur et al. Mol. Membr. Biol. 14:45064, 1997). Estas proteínas citotóxicas presentes naturalmente incluyen proteínas de mamíferos como la perforina y proteínas bacterianas como la aerolisina (producida por Aeromonas hydrophila), α-hemolisina (producida por Staphylococcus aureus), toxina alfa (producida por Clostridium septicum), -toxina (producida por Bacillus thuringiensis), antígeno protector de antrax, toxina VCC de Vibrio cholerae, leucocidinas Staphylococcus, toxina LSL de Laetiporus sulphureus, toxina épsilon de Clostridium perfringens, e hidralisinas producidas por Cnidaria spp.

Algunas de estas proteínas citotóxicas, como, por ejemplo, la proaerolisina y la toxina alfa, se sintetizan como protoxinas inactivas. Estas protoxinas contienen funcionalidades específicas entre las que se incluyen un dominio de unión, que permite la unión de la protoxina a una célula, un dominio de toxina, y un dominio de péptido inhibidor N-terminal o C-terminal que contiene un sitio de clivaje de la proteasa. El clivaje del dominio de péptido inhibidor en el sitio de clivaje de la proteasa provoca la activación de la protoxina, causando la oligomerización de la citotoxina en la membrana plasmática, produciendo poros que conducen a la muerte rápida de la célula citolítica (Rossjohn et al. J. Struct. Biol. 121:92-100, 1998). La formación de poros altera físicamente las membranas celulares y provoca la muerte de células en todas las fases del ciclo celular, incluyendo las células no proliferativas (es decir, se detienen). Estas citotoxinas no son específicas por lo que respecta al tipo de células que son capaces de matar, dado que sus dominios de unión se dirigen a moléculas presentes en la mayoría de las células, y generalmente son activadas por proteasas que no son específicas de una célula.

Se ha propuesto que las proteínas formadoras de poros citolíticas o sus versiones modificadas presentan un potencial terapéutico para el tratamiento del cáncer. Por ejemplo, la Patente estadounidense nº 5.777.078 describe agentes formadores de poros que son activados en la superficie de una célula por una serie de condiciones, incluyendo la proteolisis, para lisar la célula. Estos agentes formadores de poros se pueden utilizar generalmente para destruir células no deseadas asociadas con una condición patológica en un animal. Estas células incluyen, a título meramente enunciativo, células tumorales, células que están crónicamente infectadas con un virus, o células que cuando están mal reguladas o expresadas provocan un estado patológico, como, por ejemplo, las células del sistema inmunológico. WO 98/20135 describe métodos y composiciones relacionados con las proproteínas de la exotoxina Pseudomonas modificadas para que presenten una toxicidad selectiva. La exotoxina es modificada para que sea activada por una proteasa deseada mediante la inserción de una secuencia sensible a la proteasa en la proproteína. En un ejemplo la exotoxina es modificada para insertar un sitio de clivaje de un antígeno prostático específico (PSA) al objeto de fijar como objetivo y matar a las células cancerígenas prostáticas.

La Solicitud de Patente estadounidense nº 2004/0235095 describe el uso de proteínas formadoras de poros citolíticas modificadas para el tratamiento del cáncer de próstata y otros tipos de cánceres. Las proteínas citolíticas pueden ser modificadas para incluir un sitio de clivaje específico para la próstata y/o un dominio diana específico para la próstata y se pueden utilizar para fijar como objetivo y matar selectivamente a las células cancerígenas prostáticas.

El cáncer se caracteriza por un incremento del número de células neoplásicas o anómalas derivadas de un tejido normal, que proliferan para formar una masa tumoral, la invasión de tejidos adyacentes por parte de estas células tumorales neoplásicas, y la generación de células malignas que finalmente se propagan a través de la sangre o del sistema linfático a los nódulos linfáticos regionales y a lugares distantes mediante un proceso denominado metástasis. En un estado canceroso, una célula prolifera en condiciones en las que las células normales no proliferarían. Por lo general, a diferencia de las células normales, las células cancerígenas continúan reproduciéndose, no se especializan ni maduran, y tienen la capacidad de propagarse desde el tejido de origen a otros lugares del cuerpo. Por lo general, estas características de las células cancerígenas se producen como consecuencia de cambios en el patrón relativo de la expresión genética dentro de estas células en comparación con el de las células normales. Muchas estrategias para desarrollar terapias para el tratamiento del cáncer se han concentrado en aprovechar las diferencias en la expresión genética entre las células normales y las células cancerígenas, y se fijan como objetivo a las células cancerígenas utilizando marcadores moleculares que son específicos para las células cancerígenas.

Por lo contrario, la hiperplasia prostática benigna (HPB, también conocida como hipertrofia prostática benigna) es un estado no canceroso resultante de un aumento de tamaño de la glándula prostática como consecuencia de la progresión natural del crecimiento de la próstata con la edad. El aumento de tamaño de la próstata puede ser resultado de una mayor proliferación de las células prostáticas o de un aumento del tamaño de las células prostáticas. Habitualmente este crecimiento progresivo de la próstata no causa problemas hasta que se alcanza una edad avanzada. El Instituto Nacional de Salud (NIH) estadounidense calcula que el 60% de los hombres estadounidenses de más de 60 y menos de 70 años tienen síntomas de HPB, y que esta condición afecta a más del 90% de los hombres de entre 70 y 80 años. Aproximadamente 115 millones de hombres en todo el mundo del grupo de edades de más de 50 años presentan diversos grados de HBP. Debido al envejecimiento de la población, se espera que la prevalencia aumente de forma sustancial en los próximos 20 años. La HPB severa puede provocar graves problemas, tales como infecciones del tracto urinario, daños en la vejiga y renales, incluyendo litiasis vesical, incontinencia y, lo que es más importante, hematuria grave y fallo renal debido a la uropatía obstructiva.

En la actualidad hay varias estrategias disponibles para el tratamiento de la HPB. Estas incluyen la espera vigilante, la terapia médica como la terapia con el bloqueador alfa y la terapia con finasterida, dilatación con balón y diversos procedimientos quirúrgicos, tales como la incisión transuretral de la próstata (ITUP), la resección transuretral de la próstata (RTUP) y la prostatectomía abierta. Pocos tratamientos carecen de consecuencias adversas y este es particularmente el caso de los tratamientos para la HPB, donde existe un delicado equilibrio entre las ventajas y las desventajas de los tratamientos disponibles. Entre los eventos adversos asociados con los tratamientos disponibles actuales para la HPB se encuentran la impotencia (en diversos procedimientos quirúrgicos, que oscilan entre el 4% y el 40%, la incidencia de la impotencia también aumenta después de algunos tratamientos médicos), la incontinencia (incontinencia por estrés aproximadamente del 3% después de la cirugía, con la incontinencia urinaria total aproximándose al 1%) y la necesidad de un nuevo tratamiento. El análisis combinado de los datos publicados estimó que la probabilidad media de la mortalidad perioperatoria (muerte en el plazo de 90 días a partir de un procedimiento) era del 1,5% para la RTUP. En el caso de la cirugía abierta era del 2,4% y del 3,5% para la dilatación con balón.

En la actualidad, la terapia hormonal utilizada con más frecuencia es la administración oral de finasterida. La finasterida, comercializada con el nombre comercial de Proscar™ de Merck & Co. Inc., Whitehouse Station, N.J., es un compuesto sintético 4-azasteroide, un inhibidor específico de la 5α-reductasa Tipo II, y una enzima intracelular que convierte la testosterona andrógena en 5α-dihidrotestosterona (DHT). La finasterida ayuda a encoger la próstata agradada y reduce el PSA elevado debido a las condiciones prostáticas benignas. No obstante, se sabe que la finasterida causa efectos secundarios indeseables,... [Seguir leyendo]

1. Una proteína formadora de poros modificada para utilizarla en el tratamiento de la hiperplasia prostática benigna (HPB), obteniendo dicha proteína formadora de poros modificada de una proteína de proaerolisina formadora de poros naturalmente presente y que comprende una o más modificaciones selectivas para la próstata seleccionadas de una secuencia de activación clivable por una proteasa específica para la próstata, y uno o más dominios diana específicos para la próstata capaces de dirigirse selectivamente a las células prostáticas, donde dicha proteína formadora de poros modificada es capaz de matar selectivamente las células prostáticas.

2. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo con la reivindicación 1, cuando dicha proteína formadora de poros modificada se vaya a utilizar en combinación con uno ó más tratamientos para la hiperplasia protática benigna.

3. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, cuando la proteína formadora de poros naturalmente presente sea la proaerolisina de Aeromonas hydrophila.

4. La proteína formadora de poros modificada, de acuerdo con la reivindicación 3, cuando la proteína formadora de poros modificada comprenda la secuencia de aminoácidos recogida en la SEC. ID. Nº 31.

5. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, cuando dicha proteína formadora de poros modificada comprenda una secuencia de activación que se pueda someter a clivaje con una proteasa específica para la próstata.

6. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo con la reivindicación 5, cuando dicha proteína formadora de poros modificada comprenda un dominio diana específico para la próstata.

7. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo con la reivindicación 6, cuando dicha proteína formadora de poros comprenda una secuencia de activación que se pueda someter a clivaje con una proteasa específica de la próstata, y uno o más dominios diana específicos para la próstata.

8. La proteína formadora de poros de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, cuando dicha secuencia de activación que se puede someter a clivaje con una proteasa específica para la próstata sustituya funcionalmente una secuencia de activación natural de la mencionada proteína formadora de poros naturalmente presente.

9. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, cuando dicha proteasa específica para la próstata sea un antígeno específico para la próstata (PSA), un antígeno prostático específico de membrana (PSMA) o una calicreína glandular humana 2 (hK2).

10. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo con la reivindicación 9, cuando dicha proteasa específica para la próstata sea un antígeno específico para la próstata (PSA).

11. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 7, cuando dicho dominio diana específico para la próstata sea la hormona que libera a la hormona luteinizante (LHRH) o un anticuerpo para el antígeno prostático específico de membrana.

12. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, cuando la mencionada proteína formadora de poros modificada comprenda también una o más mutaciones en un dominio de unión de dicha proteína formadora de poros naturalmente presente.

13. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, cuando dicha proteína formadora de poros modificada comprenda también una etiqueta de afinidad.

14. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, cuando dicha proteína formadora de poros modificada esté formulada para la administración intraprostática.

15. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, cuando dicha proteína formadora de poros modificada esté formulada para la administración intravenosa.

16. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, cuando la mencionada proteína formadora de poros modificada comprenda también una o más mutaciones en un dominio de unión del lóbulo grande de la proaerolisina.

17. La proteína formadora de poros modificada, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, cuando la 5 proteína formadora de poros modificada comprenda la secuencia de aminoácidos recogida en la SEC. ID. Nº 4.

18. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo con la reivindicación 17, cuando dicha mutación o más mutaciones se seleccionen de una mutación en la posición Y162, una mutación en la posición W324, una mutación en la posición R323, una mutación en la posición R336, y una mutación en la posición W127.

19. La proteína formadora de poros modificada de acuerdo con la reivindicación 8, cuando al menos una mutación 10 es R336A.

20. El uso de la proteína formadora de poros modificada de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 anteriores en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la hiperplasia prostática benigna (HPB).