Formulaciones líquidas de interferón estabilizadas, exentas de hsa.

Una composición farmacéutica líquida estabilizada, exenta de HSA,

que comprende un interferón beta (IFN-beta), en la que dicha formulación es una solución que comprende un tampón, un agente tensioactivo Poloxamer 188, un agente de isotonicidad y un agente antioxidante que es metionina.

Formulaciones líquidas de interferón estabilizadas, exentas de hsa.

CAMPO DEL INVENTO

El invento se refiere en términos generales a unas composiciones farmacéuticas que contienen interferón beta, más particularmente a unas formulaciones estabilizadas de interferón beta, que están exentas de albúmina de suero humano (HSA) como un excipiente farmacéutico añadido.

ANTECEDENTES DEL INVENTO

Los interferones son unas citocinas, es decir unas proteínas solubles que transmiten mensajes entre células y desempeñan un cometido esencial en el sistema inmunitario ayudando a destruir a los microorganismos que causan infecciones y reparando cualquier daño resultante. Los interferones son secretados de modo natural por células infectadas y fueron identificados por primera vez en 1957. Su nombre se deriva del hecho de que ellos “interfieren” en la replicación y producción de virus.

Los interferones exhiben una actividad tanto antivírica como antiproliferativa. Sobre la base de las propiedades bioquímicas e inmunológicas, los interferones humanos que se presentan en la naturaleza son agrupados en tres clases principales: interferón alfa (leucocitos) , interferón beta (fibroblastos) e interferón gamma (sistema inmunitario) . El interferón alfa está aprobado actualmente en los Estados Unidos de América y otros países para el tratamiento de la leucemia de células pilosas, de las verrugas venéreas, del sarcoma de Kaposi (un cáncer que corrientemente aflige a pacientes que padecen del síndrome de la deficiencia inmunitaria adquirida (SIDA) ) , y de una hepatitis no A, no B crónica.

Además, los interferones (IFNs) son unas glicoproteínas producidas por el cuerpo como respuesta a una infección causada por virus. Ellos inhiben la multiplicación de virus en células protegidas. Por consistir en una proteína de bajo peso molecular, los IFNs son notablemente no específicos en su acción, es decir que un IFN inducido por un virus es efectivo contra una amplia gama de otros virus. Ellos, sin embargo, son específicos para ciertas especies, es decir, un IFN producido por una especie estimulará solamente la actividad vírica en células de la misma especie o de una especie estrechamente relacionada. Los IFNs fueron el primer conjunto de citocinas que se aprovecharon por sus potenciales actividades antitumorales y antivíricas.

Los tres IFNs principales son citados como IFN-α, IFN-β e IFN-y. Dichas clases principales de IFNs fueron clasificadas inicialmente de acuerdo con sus células de origen (leucocitos, fibroblastos o células T) . Sin embargo, quedó puesto en claro que varios tipos pueden ser producidos por una célula. Por lo tanto, ahora el IFN de leucocitos es denominado IFN-α, el IFN de fibroblastos es denominado IFN-β y el IFN de células T es denominado IFN-y. Hay también un cuarto tipo de IFN, el IFN de linfoblastoides, producido en el linaje de células “Namalwa” (que se deriva del linfoma de Burkitt) , que parece producir una mezcla de IFN tanto de leucocitos como de fibroblastos.

La unidad de interferón o la unidad internacional para interferón (U o UI, por unidad internacional) ha sido informada como una medida de la actividad de IFN definida como la cantidad necesaria para proteger a un 50 % de las células contra un daño causado por virus. El ensayo que se puede usar para medir una actividad biológica es el ensayo de inhibición del efecto citopático tal como se ha descrito (en las citas de Rubinstein, y colaboradores 1981; y de Familletti, P. C., y colaboradores, 1981) . En este ensayo antivírico para detectar un interferón, alrededor de 1 unidad/ml de interferón es la cantidad necesaria para producir un efecto citopático del 50 %. Las unidades son determinadas con respecto al patrón de referencia internacional para Hu-IFN-beta proporcionado por el Instituto Nacional de la Salud (National Institutes of Health) (Pestka, página 1986) .

Cada clase de IFN contiene varios tipos distintos. Los IFN-β y IFN-y son cada uno el producto de un único gen.

Las proteínas clasificadas como IFNs-α son el grupo más diverso, que contiene aproximadamente 15 tipos. Hay un racimo de genes de IFN-α en el cromosoma 9, que contiene por lo menos 23 miembros, 15 de los cuales son activos y han sido transcritos. Los IFNs-α maduros no están glicosilados.

Los IFNs-α y IFN-β tienen todos ellos la misma longitud (165 o 166 aminoácidos) con unas actividades biológicas similares. Los IFNs-y tienen una longitud de 146 aminoácidos, y se asemejan menos cercanamente a las clases α y β. Solamente los IFNs-y pueden activar a los macrófagos o inducir la maduración de células T asesinas. Estos nuevos tipos de agentes terapéuticos son denominados algunas veces agentes modificadores de la respuesta biológica (BRMs acrónimo de Biologic Response Modifiers) , puesto que ellos tienen un efecto sobre la respuesta del organismo frente al tumor, afectando al reconocimiento por medio de una modulación inmunitaria.

El interferón de fibroblastos humanos (IFN-β) tiene una actividad antivírica y puede también estimular a células asesinas naturales contra células neoplásicas. Es un polipéptido con un tamaño de aproximadamente 20.000 Da inducido por virus y ARNs bicatenarios (de doble hebra) . A partir de la secuencia de nucleótidos del gen para un interferón de fibroblastos, clonada por una tecnología de ADN recombinante, (Der y nk y colaboradores 1980) dedujeron la secuencia completa de aminoácidos de la proteína. Ésta tiene una longitud de 166 aminoácidos.

Shepard y colaboradores (1981) describieron una mutación en la base 842 (Cys → Tyr en la posición 141) que anulaba su actividad antivírica, y un clon variante con una supresión (deleción) de los nucleótidos 1.119-1.121.

Mark y colaboradores (1984) introdujeron una mutación artificial reemplazando la base 469 (T) por (A) causando un cambio de aminoácidos de Cys → Ser en la posición 17. Se informó de que el resultante IFN-β era tan activo como el IFN-β “natural” y estable durante un almacenamiento a largo plazo (-70ºC) .

El Rebif® (de Serono - interferón β humano recombinante) , que es el último desarrollo en la terapia con un interferón para la esclerosis múltiple (MS) , es el interferón (IFN) beta-1a, producido a partir de linajes de células de mamíferos. Su nombre internacional sin propietario (INN, acrónimo de International Nonproprietar y Name) el “interferón beta-1a”.

Igual que con todos los agentes farmacéuticos basados en proteínas, un obstáculo principal que se debe de superar en el uso de un IFN-beta como un agente terapéutico, es la pérdida de utilidad farmacéutica que puede resultar de su inestabilidad en formulaciones farmacéuticas.

Las inestabilidades físicas que amenazan a la actividad de los polipéptidos y a su eficacia en formulaciones farmacéuticas incluyen una desnaturalización y una formación de aglomerados solubles e insolubles, mientras que las inestabilidades químicas incluyen una hidrólisis, una formación de imidas, una oxidación, una racemización y una desamidación. Se conoce que algunos de estos cambios conducen a la pérdida o a la reducción de la actividad farmacéutica de la proteína que interesa. En otros casos, se desconocen los efectos exactos de estos cambios, pero se considera todavía que los resultantes productos de degradación son inaceptables farmacéuticamente debido a su potencial de tener efectos colaterales indeseados.

La estabilización de polipéptidos en composiciones farmacéuticas sigue siendo un sector en que el tanteo desempeña un cometido principal (revisado por Wang (1999) Int. J. Pharm. 185:129-188; y por Wang y Hanson (1988) J. Parenteral Sci. Tech. 42:S3-S26) . Los excipientes que se añaden a las formulaciones farmacéuticas de polipéptidos para aumentar su estabilidad incluyen tampones, azúcares, agentes tensioactivos, aminoácidos, poli (etilen glicoles) , y polímeros, pero los efectos estabilizadores de estos aditivos químicos varían dependiendo de la proteína.

Las actuales formulaciones de IFN-beta emplean el uso de un HSA como un agente intensificador de la solubilidad para el IFN-beta. Sin embargo, el uso de un HSA tiene algunas desventajas. Un HSA es un producto de sangre humana y por lo tanto debe de ser cosechado a partir de individuos humanos. Mientras que se están adoptando medidas para reducir el riesgo, el uso de productos de sangre humana, tales como un HSA, acarrea consigo la introducción potencial de virus humanos tales como los VIH y VCH.

Consiguientemente, hay una necesidad de adicionales composiciones farmacéuticas de... [Seguir leyendo]

10. Shepard H. M. y colaboradores, Nature 1981; 294.

56. 565.

1. Una composición farmacéutica líquida estabilizada, exenta de HSA, que comprende un interferón beta (IFN-beta) , en la que dicha formulación es una solución que comprende un tampón, un agente tensioactivo Poloxamer 188, un agente de isotonicidad y un agente antioxidante que es metionina.

2. La composición de la reivindicación 1, en la que dicho IFN-beta es un IFN-beta recombinante humano.

3. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho tampón está presente en una cantidad suficiente para mantener el pH de dicha composición dentro de un intervalo de más o menos 0, 5 unidades de un pH especificado, en donde el pH especificado es de aproximadamente 3, 0 a aproximadamente 5, 0.

4. La composición de la reivindicación precedente, en la que dicho pH es de 3, 5 ± 0.2.

5. La composición de la reivindicación precedente, en la que dicho pH es de 4, 5 ± 0.2.

6. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho tampón está presente en una concentración de 5 mM a 500 mM.

7. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho tampón está presente en una concentración de 10 mM.

8. El tampón de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho tampón es un tampón de acetato.

9. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho agente de tonicidad es manitol.

10. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho agente de isotonicidad está presente en una concentración de 0, 5 mg/ml a 500 mg/ml.

11. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho agente de isotonicidad está presente en una concentración de 55 mg/ml.

12. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho agente tensioactivo Poloxamer 188 está presente en una concentración de 0, 01 mg/ml a 10 mg/ml.

13. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho agente tensioactivo Poloxamer 188 está presente en una concentración de 1 mg/ml.

14. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho agente antioxidante metionina está presente en una concentración de 0, 01 a 5, 0 mg/ml.

15. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho agente antioxidante metionina está presente en una concentración de 0, 1 mg/ml.

16. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho interferón beta está presente en una concentración de 10 µg/ml a 800 µg/ml.

17. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho interferón beta está presente en una concentración de 22, 44, 88 o 264 µg/ml.

18. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicha composición es una solución acuosa.

19. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además un agente bacteriostático.

20. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho agente bacteriostático es alcohol bencílico.

21. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho agente bacteriostático está presente en una concentración de 0, 1 % a 2, 0 %.

22. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho agente bacteriostático está presente en una concentración de 0, 2 % a 0, 3 %.

23. Un método para preparar una composición farmacéutica líquida, estabilizada, exenta de HSA, de acuerdo con las reivindicaciones 1-22, en donde dicho método comprende añadir unas cantidades calculadas del agente

tensioactivo Poloxamer 188, el agente antioxidante metionina y el agente de isotonicidad a la solución tamponada y luego añadir el interferón beta (IFN-beta) .

24. Un recipiente herméticamente cerrado en condiciones estériles y apropiadas para un almacenamiento antes del uso, que comprende la formulación farmacéutica líquida de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones desde 1 hasta 22.

25. El recipiente de la reivindicación 24, en donde dicho recipiente es una jeringa previamente llenada para la administración de una sola dosis.

26. El recipiente de la reivindicación 24, en donde dicho recipiente es un vial.

27. El recipiente de la reivindicación 24, en donde dicho recipiente es un cartucho para un auto-inyector.

28. El recipiente de la reivindicación 25 o 26 en donde dicho recipiente está destinado a la administración de una 15 sola dosis o de múltiples dosis.

29. Un estuche para una administración de múltiples dosis de una composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones desde 18 hasta 21, en donde el estuche comprende un primer recipiente llenado con una composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones desde 1 hasta 17 y un segundo cartucho llenado con una solución del agente bacteriostático.

Figura 3

Figura 7

Figura 10 Figura 11

Figura 13