Formulaciones líquidas de interferón estabilizadas.

Una composición farmacéutica líquida estabilizada exenta de HSA,

que comprende:

a. Interferón-beta 1a recombinante de ser humano, 0,088 mg/mL;

b. Monohidrocloruro de L-lisina, 27,3 mg/mL;

c. L-metionina, 0,12 mg/mL;

d. Poloxamer 188, 0,5 mg/mL; y

e. Acetato de sodio 10 mM a un pH de 4,7 ± 0,2.

Formulaciones líquidas de interferón estabilizadas Campo de la invención La invención se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen un interferón, más particularmente a 5 formulaciones de interferón-beta que comprenden un agente amortiguador del pH, un aminoácido y un antioxidante.

Antecedentes de la invención Los interferones son citoquinas, es decir proteínas solubles que transmiten mensajes entre células y juegan un papel esencial en el sistema inmune ayudando a destruir microrganismos que causan infección y reparando cualquier daño resultante. Los interferones son secretados de forma natural por las células infectadas y se identificaron por

primera vez en 1957. Su nombre deriva del hecho de que “interfieren” en la replicación y la producción de virus.

Los interferones exhiben actividad tanto antivírica como antiproliferativa. Sobre la base de las propiedades bioquímicas e inmunológicas, los interferones que se producen de manera natural en el ser humano se agrupan en tres clases principales: interferón-alfa (leucocito) , interferón-beta (fibroblasto) e interferón-gamma (inmune) . El alfainterferón está actualmente aprobado en los Estados Unidos y en otros países para el tratamiento de la leucemia de las células pilosas, verrugas venéreas, sarcoma de Kaposi (un cáncer que aflige comúnmente a los pacientes que padecen del Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) y de hepatitis crónica no A y no B.

Además, los interferones (IFNs) son glicoproteínas producidas por el cuerpo en respuesta a una infección vírica. Inhiben la multiplicación de los virus en células protegidas. Los IFNs, que consisten en una proteína de bajo peso molecular, son notablemente no específicos en su acción, es decir el IFN producido por un virus es efectivo contra una amplia gama de otros virus. Sin embargo, son específicos de la especie, es decir el IFN producido por una especie sólo estimulará actividad antivírica en células de la misma especie o de especies estrechamente relacionadas. Los IFNs fueron el primer grupo de citoquinas en ser explotados por sus potenciales actividades antitumorales y antivíricas.

Los tres IFNs principales se denominan IFN-!, IFN-∀ e IFN-#. Tales clases principales de IFNs fueron inicialmente clasificadas según sus células de origen (leucocitos, fibroblastos o células T) . Sin embargo, llegó a ser evidente que una célula podría producir varios tipos. Por tanto, el IFN de leucocitos ahora se llama IFN-!, el IFN de fibroblastos es IFN-∀ y el IFN de células T es IFN-#. También existe un cuarto tipo de IFN, el IFN de linfoblastoides, producido en la línea celular “Namalwa” (derivada del linfoma de Burkitt) , el cual parece que produce una mezcla tanto de IFN de leucocitos como de fibroblastos.

La unidad de interferón o unidad internacional para el interferón (U o IU, para la unidad internacional) ha sido referida en la bibliografía como una medida de la actividad de un IFN, definida como la cantidad necesaria para proteger el 50% de las células contra el daño producido por un virus. El ensayo que puede usarse para medir la bioactividad es el ensayo de inhibición del efecto citopático que está descrito (Rubinstein et al., 1981; Familletti, P.C., et al., 1981) . En este ensayo antivírico del interferón, la cantidad necesaria para producir un efecto citopático del

50% es aproximadamente 1 unidad/mL. Las unidades se determinan con respecto al patrón internacional de referencia para Hu-IFN-beta proporcionado por el National Institutes of Health (Pestka, S. 1986) .

Cada clase de IFN contiene varios tipos distintos. IFN-∀ e IFN-# son cada uno el producto de un único gen.

Las proteínas clasificadas como IFNs-! son el grupo más diverso que contiene aproximadamente 15 tipos. Hay un grupo de genes IFN-! en el cromosoma 9, que contiene al menos 23 miembros, de los cuales 15 son activos y se transcriben. Los IFN-!s maduros no están glicosilados.

Los IFNs-! e IFN-∀ son todos de la misma longitud (165 ó 166 aminoácidos) con actividades biológicas similares. Los IFN-# tienen una longitud de 146 aminoácidos, y se parecen a las clases ! y ∀ menos estrechamente. Sólo los IFNs-# pueden activar macrófagos o inducir la maduración de las células T asesinas. Estos nuevos tipos de agentes terapéuticos pueden llamarse algunas veces agentes modificadores de la respuesta biológica (BRMs) , porque tienen 45 un efecto sobre la respuesta del organismo al tumor, influyendo sobre el reconocimiento vía inmunomodulación.

El interferón de fibroblastos de ser humano (IFN-∀) tiene actividad antivírica y también puede estimular a las células asesinas naturales contra las células neoplásicas. Es un polipéptido de aproximadamente 20.000 Da inducido por virus y RNAs de doble hebra. A partir de la secuencia de nucleótidos del gen del interferón de fibroblastos, clonado mediante tecnología de DNA recombinante (Der y nk et al. 1980) se dedujo la secuencia completa de aminoácidos de 50 la proteína. Tiene una longitud de 166 aminoácidos.

Shepard et al. (1981) describieron una mutación en la base 842 (Cis º Tir en la posición 141) que abolió su actividad antivírica, y un clon variante con una supresión de los nucleótidos 1119-1121.

Mark et al. (1984) insertaron una mutación artificial remplazando la base 469 (T) con (A) causando un cambio de aminoácido de Cis º Ser en la posición 17. Se informó que el IFN-∀ resultante era tan activo como el IFN-∀ “natural” y estable durante el almacenamiento a largo plazo (-70ºC) .

Rebif® (Serono – interferón-∀ recombinante de ser humano) , el último desarrollo en terapia de interferones para la 5 esclerosis múltiple (MS) , es interferón (IFN) -beta-1a, producido a partir de líneas de células de mamíferos. Su Nombre Internacional no registrado (INN) es “interferón-beta-1a”.

Cook Stuart D. presenta una revisión acerca de interferones-beta como las terapias aprobadas más ampliamente usadas para la esclerosis múltiple.

Como con todos los productos farmacéuticos, un obstáculo importante que ha de superarse en el uso de IFN-beta como agente terapéutico es la pérdida de utilidad farmacéutica que puede proceder de su inestabilidad en las formulaciones farmacéuticas.

Las inestabilidades físicas que amenazan la actividad y la eficacia de los polipéptidos en las formulaciones farmacéuticas incluyen la desnaturalización y la formación de agregados solubles e insolubles, mientras que las inestabilidades químicas incluyen hidrólisis, formación de imidas, oxidación, racemización y desamidación. Se sabe que algunos de estos cambios conducen a la pérdida o reducción de la actividad farmacéutica de la proteína de interés. En otros casos, los efectos precisos de estos cambios son desconocidos, pero los productos de degradación resultantes son aún considerados farmacéuticamente inaceptables debido a su potencial para producir efectos secundarios indeseables.

La estabilización de polipéptidos en composiciones farmacéuticas sigue siendo un área en la cual los ensayos de prueba y error juegan un papel importante (revisado por Wang (1999) Int. J. Pharm. 185:129-188; Wang y Hanson (1988) J. Parenteral Sci. Tech. 42:S3-S26) . Los excipientes que se añaden a las formulaciones farmacéuticas de polipéptidos para aumentar su estabilidad incluyen agentes de amortiguación del pH, azúcares, tensioactivos, aminoácidos, polietilenglicoles y polímeros, pero los efectos estabilizantes de estos aditivos químicos varían dependiendo de la proteína.

Lam Xanthe M. et al., describen la interacción entre alcohol bencílico e IFN-gamma. Con el fin de evitar la desestabilización del interferón es necesaria la minimización de la concentración de alcohol bencílico y la selección de acetato como el agente de amortiguación del pH.

Las formulaciones actuales de IFN-beta emplean el uso de HSA como un agente potenciador de la solubilidad de IFN-beta. Sin embargo, el uso de HSA tiene algunos inconvenientes. HSA es un producto de la sangre de ser

humano y por lo tanto tiene que cosecharse en sujetos humanos. Aunque se toman medidas para reducir el riesgo, el uso de productos derivados de sangre de ser humano, tales como HSA, conlleva la introducción potencial de virus de ser humano tales como HIV y HCV.

El documento US 5762923A describe una composición acuosa de IFN-alfa exenta de HSA la cual comprende además alcohol bencílico y un detergente no iónico tal como Polysorbate 20 en cantidades suficientes para estabilizar el IFN-alfa, así como un agente de amortiguación del pH ácido tal como acetato... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica líquida estabilizada exenta de HSA, que comprende:

a. Interferón-beta 1a recombinante de ser humano, 0, 088 mg/mL;

b. Monohidrocloruro de L-lisina, 27, 3 mg/mL; 5 c. L-metionina, 0, 12 mg/mL;

d. Poloxamer 188, 0, 5 mg/mL; y

e. Acetato de sodio 10 mM a un pH de 4, 7 ± 0, 2.

2. La composición según la reivindicación 1, que además comprende un agente bacteriostático seleccionado de fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, alcohol bencílico, alquilparabén (metil, etil, propil, butil y 10 semejantes) , cloruro de benzalconio, cloruro de benzetonio, dehidroacetato de sodio y timerosal.

3. La composición según la reivindicación 2, en la que el agente bacteriostático es alcohol bencílico.

4. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la cual el interferón está al menos en aproximadamente 96% o al menos en aproximadamente 98% como un monómero.

5. Un recipiente herméticamente sellado en condiciones estériles y apropiadas para el almacenamiento antes 15 del uso, que comprende la formulación líquida farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

6. El recipiente según la reivindicación 5, en que dicho recipiente es una jeringa, un vial o un auto-inyector prerellenados.

7. Uso de una composición de IFN según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la esclerosis múltiple.

8. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para usar en un método para el tratamiento de la esclerosis múltiple.