Clones de ADN infeccioso quimérico de circovirus porcino y uso de los mismos.

Una vacuna viral que protege a un cerdo contra infección viral o síndrome de desmedro multisistémico postdestete (PMWS) provocado por PCV2 caracterizada por comprender un vehículo no tóxico fisiológicamente aceptable,

uno o más adyuvantes y una cantidad inmunogénica de un miembro seleccionado entre el grupo que consiste en:

(a) una molécula de ácido nucleico quimérico de circovirus porcino (PCV1-2) caracterizada por tener una molécula de ácido nucleico que codifica un PCV1 no patógeno, que contiene el gen del marco abierto de lectura 2 (ORF2) inmunogénico de un PCV2 patógeno en lugar del gen ORF2 de la molécula de ácido nucleico de PCV1;

(b) una molécula de ácido nucleico quimérico que tiene una secuencia de nucleótidos establecida en la SEC ID Nº 2, su hebra complementaria o una secuencia de nucleótidos que tiene al menos un 95 % de homología con la secuencia de nucleótidos de la SEC ID Nº 2;

(c) un plásmido o vector viral que contiene la molécula de ácido nucleico quimérico de circovirus porcino (PCV1-2), la hebra complementaria o la secuencia de nucleótidos que tiene al menos 95 % de homología con la secuencia de nucleótidos de la SEC ID Nº 2; y

(d) un circovirus porcino quimérico hecho de una molécula de ácido nucleico quimérico de PCV1-2, en la que el gen de la cápsida de ORF2 de un PCV1 no patógeno es reemplazado con el gen de la cápsida de ORF2 de un PCV2 patógeno,

y, opcionalmente, una cantidad inmunogénica de al menos un antígeno porcino adicional.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E10184612.

Solicitante: VIRGINIA TECH INTELLECTUAL PROPERTIES, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 2200 KRAFT DRIVE, SUITE 1050 BLACKSBURG, VA 24060 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: MENG,XIANG-JIN, FENAUX,Martijn , HALBUR,Patrick,G.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A01N63/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA.A01N CONSERVACION DE CUERPOS HUMANOS O ANIMALES O DE VEGETALES O DE PARTES DE ELLOS (conservación de alimentos o productos alimenticios A23 ); BIOCIDAS, p. ej. EN TANTO QUE SEAN DESINFECTANTES, PESTICIDAS O HERBICIDAS (preparaciones de uso médico, dental o para el aseo que eliminan o previenen el crecimiento o la proliferación de organismos no deseados A61K ); PRODUCTOS QUE ATRAEN O REPELEN A LOS ANIMALES; REGULADORES DEL CRECIMIENTO DE LOS VEGETALES. › Biocidas, productos que repelen o atraen a los animales perjudiciales, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos, virus, hongos microscópicos, animales, o sustancias producidas por, u obtenidas a partir de microorganismos, virus, hongos microscópicos o animales, p. ej. encimas o productos de fermentación (que contienen compuestos de constitución determinada A01N 27/00 - A01N 59/00; algas unicelulares A01N 65/03).
  • A61K35/76 A […] › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 35/00 Preparaciones medicinales que contienen sustancias de constitución indeterminada o sus productos de reacción. › Virus; Partículas subvirales; Bacteriófagos.
  • A61K38/00 A61K […] › Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00).
  • A61K39/12 A61K […] › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Antígenos virales.
  • A61K39/295 A61K 39/00 […] › Antígenos virales polivalentes (virus de la viruela o de la varicela A61K 39/285 ); Mezclas de antígenos virales y bacterianos.
  • A61K48/00 A61K […] › Preparaciones medicinales que contienen material genético que se introduce en las células del cuerpo vivo para tratar enfermedades genéticas; Terapia génica.
  • A61P31/20 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.A61P 31/00 Antiinfecciosos, es decir antibióticos, antisépticos, quimioterápicos. › para los virus DNA.
  • A61P43/00 A61P […] › Medicamentos para usos específicos, no previstos en los grupos A61P 1/00 - A61P 41/00.
  • C07K14/01 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › virus ADN.
  • C12N1/15 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › modificados por la introducción de material genético extraño.
  • C12N1/19 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
  • C12N1/21 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
  • C12N15/09 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
  • C12N15/11 C12N 15/00 […] › Fragmentos de ADN o de ARN; sus formas modificadas (ADN o ARN no empleado en tecnología de recombinación C07H 21/00).
  • C12N15/34 C12N 15/00 […] › Proteínas de virus ADN.
  • C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
  • C12N15/64 C12N 15/00 […] › Métodos generales para la preparación del vector, para su introducción en la célula o para la selección del huésped que contiene el vector.
  • C12N5/00 C12N […] › Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00).
  • C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
  • C12N7/00 C12N […] › Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00).
  • C12N7/04 C12N […] › C12N 7/00 Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00). › Inactivación o atenuación; Producción de partes elementales de virus.
  • C12P19/34 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos.
  • C12P21/02 C12P […] › C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › que tienen una secuencia conocida de varios aminoácidos, p. ej. glutation.

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Fragmento de la descripción:

Clones de ADN infeccioso quimérico de circovirus porcino y uso de los mismos Antecedentes de la invención Campo de la invención La presente invención se refiere a vacunas virales quiméricas que protegen a un cerdo contra la infección viral o el síndrome de desmedro multisistémico post-destete (PMWS) causado por PCV2.

Descripción de la técnica relacionada Circovirus porcino (PCV) se aisló originalmente como un contaminante de cultivo de células de una línea celular de riñón porcina PK-15 (1. Tischer et al., "A ver y small porcine virus with circular single-stranded DNA, " Nature 295: 64 66 (1982) ; 1. Tischer et al., "Characterization of papovavirus and picornavirus-like particles in permanent pig kidney cell lines, " Zentralbl. Bakteriol. Hyg. Otg. A. 226 (2) : 153 -167 (1974) ) . PCV es un pequeño virus icosahédrico sin envuelta que contiene un genoma de ADN circular de una sola cadena de aproximadamente 1, 76 kb. PCV está clasificado en la familia de Circoviridae, que consiste en otros tres circovirus de animales diferentes (virus de anemia de pollo (CAV) , virus de enfermedad de pico y pluma de Psittacine (PBFDV) y el circovirus de colúmbidos recientemente descubierto (CoCV) de palomas) y tres circovirus de plantas (virus del cogollo racimoso de banano, virus de podredumbre foliar del cocotero y virus de malformación del trébol subterráneo) (M. R. Bassami et al., "Psittacine beak and feather disease virus nucleotide sequence analysis and its relationship to porcine circovirus, plant circoviruses, and chicken anemia virus, " Virology 249: 453 -459 (1998) ; J. Mankertz et al., "Transcription analysis of porcine circovirus (PCV) , " Virus Genes 16: 267 -276 (1998) ; A. Mankertz et al., "Cloning and sequencing of columbid circovirus (CoCV) , a new circovirus from pigeons, " Arch. Virol. 145: 2469 -2479 (2000) ; B. M. Meehan et al., "Sequence of porcine circovirus DNA: affinities with plant circoviruses, " J. Gen. Virol. 78: 221 -227 (1997) ; B. M. Meehan et al., "Characterization of novel circovirus DNAs associated with wasting syndromes in pigs, " J. Gen. Virol.

79: 2171 -2179 (1998) ; D. Todd et al., "Comparison of three animal viruses with circular single-stranded DNA genomes, " Arch. Virol. 117: 129 -135 (1991) ) . Miembros de los tres circovirus animales reconocidos previamente (PCV, CAV, y PBFDV) no comparten la homología de secuencias de nucleótidos o determinantes antigénicos entre sí (M. R. Bassami et al., 1998, supra; D. Todd et al., 1991, supra) . El genoma del CoCV recientemente identificado compartía aproximadamente el 40% de identidad de secuencia de nucleótidos con la de PCV (A. Mankertz et al., "Cloning and sequencing of columbid circovirus (CoCV) , a new circovirus from pigeons, " Arch. Virol. 145: 2469 2479 (2000) ) . Recientemente, un circovirus humano novedoso con un genoma circular, denominado virus transmitido por transfusión o TT virus (TTV) , se identificó de individuos asociados a hepatitis después de transfusión

(H. Miyata et al., "Identification of a novel GC-rich 113-nucleotide region to complete the circular, single-stranded DNA genome of TT virus, the first human circovirus, " J. Virol. 73: 3582 -3586 (1999) ; T. Nishizawa et al., "A novel DNA virus (TTV) associated with elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknown etiology, " Biochem. Biophys. Res. Commun. 241: 92 -97 (1997) ) . De manera adicional, un minivirus humano de tipo TTV (TLMV) se identificó a partir de sangre de donantes normales (P. Biagini et al., "Genetic analysis of full-Iength genomes and subgenomic sequences of TT virus-like mini virus human isolates, " J. Gen. Virol. 82: 379 -383 (2001) ;

K. Takahashi et al., "Identification of a new human DNA virus (TTV-like mini virus, TLMV) intermediately related to TT virus and chicken anemia virus, " Arch. Virol. 145: 979 -93 (2000) ) y un tercer circovirus humano novedoso, conocido como virus SEN (SENV) , también se descubrió de seres humanos con hepatitis después de transfusión (T. Umemura et al., "SEN virus infection and its relationship to transfusion-associated hepatitis, " Hepathology 33: 1303 1311 (2001) ) . La organización genómica de tanto TTV como TLMV humanos es similar al de CAV (P. Biagini et al., 2001, supra; H. Miyata et al., 1999, supra; K. Takahashi et al., 2000, supra) . Aunque se encontraron anticuerpos para PCV en diversas especies animales incluyendo seres humanos, ratones, ganado y cerdos (G. M. Allan et al., "production preliminar y characterization and applications of monoclonal antibodies to porcine circovirus, " Vet. Immunol. Immunopathol. 43:357-371 (1994) ; G. C. Dulac and A. Afshar, "Porcine circovirus antigens in PK-15 cell line (ATCC CCL-33) and evidence of antibodies to circovirus in Canadian pigs, " Can. J. Vet. Res. 53: 431 -433 (1989) ; S. Edwards and J. J. Sands, "Evidence of circovirus infection in British pigs, " Vet. Rec. 134: 680 -1 (1994) ; J.

C. Harding and E.G. Clark, "Recognizing and diagnosing postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) , " Swine Health and Production 5: 201 -203 (1997) ; R. K. Hines and P. D. Lukert, "Porcine circovirus: a serological survey of swine in the United States, " Swine Health and Production 3: 71 -73 (1995) ; G. P. Nayar et al., "Evidence for circovirus in cattle with respirator y disease and from aborted bovine fetuses, " Can. Vet. J. 40: 277 -278 (1999) ; I. Tischer et al., "Distribution of antibodies to porcine circovirus in swine populations of different breeding farms, " Arch. Virol. 140: 737 -743 (1995) ; I. Tischer et al., "Presence of antibodies reacting with porcine circovirus in sera of humans, mice, and cattle, " Arch. Virol. 140: 1427 -1439 (1995) ) , se conoce poco con relación a la patogénesis de PCV en estas especies animales. La infección experimental de cerdos con PCV derivado de células PK-15 no produjo enfermedad clínica y de este modo, este virus no se considera que sea patógeno para los cerdos (G. M. Allan et al., "Pathogenesis of porcine circovirus; experimental infections of colostrum deprived piglets and examination of pig foetal material, " Vet. Microbiol. 44: 49 -64 (1995) ; I. Tischer et al., "Studies on epidemiology and pathogenicity of porcine circovirus, " Arch. Virol. 91: 271 -276 (1986) ) . El PCV no patógeno derivado de la línea celular PK-15 contaminada se denominó circovirus porcino tipo 1 o PCV1.

El síndrome de desmedro multisistémico post-destete (PMWS) , descrito primero en 1991 (J. C. Harding and E.G. Clark, 1997, supra) , es una enfermedad compleja de lechones de destete que está cada vez más extendida. Con la amenaza de un impacto económico serio potencial para la industria del cerdo, se hace urgente desarrollar una vacuna contra PCV2, el agente causante principal de PMWS. PMWS afecta directamente a cerdos entre 5 -18 semanas de edad. Los signos clínicos de PMWS incluyen pérdida de peso progresiva, disnea, taquipnea, anemia, diarrea, e ictericia. La tasa de mortalidad puede variar entre 1% y 2%, y hasta 40% en algunos casos complicados en el Reino Unido. (M. Muirhead, "Sources of information on PMWS/PDNS, " Vet. Rec. 150: 456 (2002) ) . Las lesiones microscópicas características de PMWS incluyen neumonía intersticial granulomatosa, Iinfadenopatía, hepatitis, y nefritis (G. M. Allan y J. A. Ellis, "Porcine circoviruses: a review, " J. Vet. Diagn. Invest. 12: 3 -14 (2000) ; J. C. Harding and E.G. Clark, 1997, supra) . Se ha localizado PMWS en cerdos en Canadá, Estados Unidos (G. M. Allan et al., "Novel porcine circoviruses from pigs with wasting disease syndromes, " Vet. Rec. 142: 467 -468 (1998) ; G. M. Allan et al., "Isolation of porcine circovirus-like viruses from pigs with a wasting disease in the USA and Europe, " J. Vet. Diagn. Invest. 10: 3 -10 (1998) ; G. M. Allan and J. A. Ellis, 2000, supra; J. Ellis et al., "Isolation of circovirus from lesions of pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome, " Can. Vet. J. 39: 44 -51 (1998) ; A. L. Hamel et al., "Nucleotide sequence of porcine circovirus associated with postweaning multisystemic wasting syndrome in pigs, " J. Virol. 72: 5262 -5267 (1998) ; M. Kiupel et al., "Circovirus-like viral associated disease in weaned pigs in Indiana, " Vet. Pathol. 35: 303 -307 (1998) ; R. Larochelle et al., "Identification and incidence of porcine circovirus in routine field cases in Quebec as determined by PCR, " Vet. Rec. 145: 140 -142 (1999) ; B. M. Meehan et al., 1998, supra; I. Morozov et al., "Detection of a novel strain of porcine circovirus in pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome, " J. Clin. Microbiol. 36: 2535 -2541 (1998) ) , la mayoría de los países europeos (G. M. Allan et al., "Isolation of porcine circovirus-like viruses from pigs with a wasting disease in the USA and Europe, " J. Vet. Diagn. Invest. 10: 3 -10 (1998) ; G. M. Allan and J. A. Ellis, 2000, supra;... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Una vacuna viral que protege a un cerdo contra infección viral o síndrome de desmedro multisistémico postdestete (PMWS) provocado por PCV2 caracterizada por comprender un vehículo no tóxico fisiológicamente aceptable, uno o más adyuvantes y una cantidad inmunogénica de un miembro seleccionado entre el grupo que consiste en:

(a) una molécula de ácido nucleico quimérico de circovirus porcino (PCV1-2) caracterizada por tener una molécula de ácido nucleico que codifica un PCV1 no patógeno, que contiene el gen del marco abierto de lectura 2 (ORF2) inmunogénico de un PCV2 patógeno en lugar del gen ORF2 de la molécula de ácido nucleico de PCV1;

(b) una molécula de ácido nucleico quimérico que tiene una secuencia de nucleótidos establecida en la SEC ID Nº 2, su hebra complementaria o una secuencia de nucleótidos que tiene al menos un 95 % de homología con la secuencia de nucleótidos de la SEC ID Nº 2;

(c) un plásmido o vector viral que contiene la molécula de ácido nucleico quimérico de circovirus porcino (PCV1-2) , la hebra complementaria o la secuencia de nucleótidos que tiene al menos 95 % de homología con 15 la secuencia de nucleótidos de la SEC ID Nº 2; y

(d) un circovirus porcino quimérico hecho de una molécula de ácido nucleico quimérico de PCV1-2, en la que el gen de la cápsida de ORF2 de un PCV1 no patógeno es reemplazado con el gen de la cápsida de ORF2 de un PCV2 patógeno,

y, opcionalmente, una cantidad inmunogénica de al menos un antígeno porcino adicional.

2. La vacuna viral de acuerdo con la Reivindicación 1, en la que dicha vacuna es una vacuna de ADN, una vacuna viva, una vacuna viva modificada, una vacuna inactivada o una vacuna atenuada.

3. La vacuna viral de acuerdo con la Reivindicación 1, en la que el antígeno porcino adicional opcional es un virus de síndrome porcino reproductor y respiratorio (PRRSV) , parvovirus porcino (PPV) o ambos.

4. La vacuna viral de acuerdo con la Reivindicación 1, en la que el adyuvante es hidróxido de aluminio, complejos

inmunoestimulantes, un polímero o copolímero de bloqueo no iónicos, una citoquina, saponina, monofosforil lípido A, muramil dipéptido, sulfato de aluminio y potasio, enterotoxina termolábil o termoestable aislada de Escherichia coli, toxina colérica o la subunidad B de la misma, toxina diftérica, toxina tetánica, toxina pertussis, adyuvante incompleto o completo de Freund o una combinación de los mismos.

5. La vacuna viral de acuerdo con una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 4, para su uso en la protección de un 30 cerdo contra infección viral o síndrome de desmedro multisistémico post-destete (PMWS) provocado por PVC2.

Fig. 1

* Codón de terminación de traducción


 

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